遺伝子ターゲッティングの組換え頻度の調節機構の解析-次世代の遺伝子治療への基礎的アプローチ-

基因打靶重组频率调控机制分析 - 下一代基因治疗的基本方法 -

• 批准号: 10878117
• 负责人: 園田 英一朗
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878117/
• 关键词: 遺伝子相同組み換え; DT40細胞; Rad51; Rad52; Rad54; DNA修復; 染色体不安定性; 姉妹染色分体交換

我々の目標は、クリーンな遺伝子治療法の開発、すなわち遺伝子ターゲッテイング法による遺伝子治療の実用化である。その第一歩として、動物細胞ではほとんど起こらない遺伝子相同組み換え(ターゲッテイング機構そのもの)をいかにして実用的なレベルに引き上げるかを目標に、本研究を開始した。現在、その目標は未だ達成されていないが、その研究手段の一つとして、動物細胞で相同組み換えの中心機構をになうと考えられる、Rad遺伝子群(Rad51,Rad51B,Rad52,Rad54,)を欠損した細胞株を作成した。それら相同組み換え遺伝子欠損細胞株の解析により、相同組み換えは、ターゲッテイングやDNA修復において予想されていた機能のみならず、細胞増殖に必須な機能があることが明らかとなった。相同組み換えは、1.動物細胞の増殖に必須であり、この機能を欠損した細胞株は、その一部またはすべての細胞が、染色体断裂を伴い死亡する。2.主としてG2期におけるDNA修復に関与しており、Gl期では、非相同組み換えに関与するKu蛋白が主として機能している。3.最初から予想されていたように、遺伝子ターゲッテイングに必須であり、上述した相同組み換えに関与するどの分子の欠損株でもターゲッテイング頻度は低下する。4.動物細胞で染色体不安定性の指標として用いられる姉妹染色体分体交換(SCE)を生成する主要な機構であることが判明した。結論として、相同組み換えは、複製中にできるゲノム上の傷を常時修復しており、その結果の一部がSCEとして出現する。またその欠損は染色体断裂による細胞死を引き起こすことが明らかとなった。これは、動物細胞の増殖において相同組み換えが常に機能していることを意味する重要な観察所見であるのみならず、その機構の微調整により遺伝子ターゲッテイングを効率よく引き起こすことができる可能性がでてきた。

My goal is to use the method of treating the disease, and the method of treating the disease is to use the method of treatment.その一歩として、Animal Cell ではほとんど起こらない伝子 are the same group as みchangeえ(ターゲッテインThe purpose of this study was to use the なレベルににき上げるかをobjective of the グそのもの)をいかにして実. Now, the goal has not been achieved yet, the research method has not been achieved, and the animal cells have been replaced by the same group as the central institution. Kaori and Rad's subgroups (Rad51, Rad51B, Rad52, Rad54,) were created using cell lines that were damaged.それらThe same group of みchanged え伝子杝子杝子杝子无码综合により, the same group of みchanged えは, ターゲッテイングやDNA It repairs and repairs the function of the function and the function of cell proliferation. The same groups are replaced, 1. The reproduction of animal cells is necessary, the function of the animal cells is damaged, the cell lines are damaged, the cells are broken, and the chromosomes are broken, which is accompanied by death. 2. The main function of DNA repair in G2 phase and Gl phase, non-identical group replacement and function of Ku protein. 3. The first one I want to do is the one I want, the one I left behind is the one I have to do, and the one I mentioned above. The same group of みえに关 and するどのmolecules are damaged by the でもターゲッテイングfrequency and the する is lowered. 4. The indicator of chromosomal instability in animal cells has been determined using the main mechanism of sister chromosome exchange (SCE). Conclusion として, Same group みReplacement えは, Copying にできるゲノム上の hurt を Constant repair しており, そのRESULT の一SCE として appears する.またその无码はChromosome breakageによる Cell deathをinducedきこすことが明らかとなった.これは、Animal cell reproductionにおいてThe same groupみchangeえが oftenにfunctionしていることをmeaningするimportantなObserve what you seeであるのみならず、そのMechanismのFine-adjustmentにより伝子ターゲッテイングをefficiencyよく citedき出こすことができるpossibilityがでてきた.

项目成果

Takata M.et al: "Homologous recombination and mon homologous end-joining pathways of DNA double strend break repire have overlapped rolas in the meintennce of." EMBO J.17. 5497-5508 (1998)

Takata M.等人：“DNA 双链断裂重复的同源重组和单同源末端连接途径在过程中与 Rolas 重叠。”

Yamaguchi-Imai,Yet al: "Homologous recombination,but not DNA repair,is reduced in ventebrate cells defecient in Rad5." Molecular and Cellular Biology. 18. 6430-6435 (1998)

Yamaguchi-Imai 等人：“在 Rad5 缺陷的脊椎动物细胞中，同源重组减少，但 DNA 修复没有减少。”