权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ゲノム損傷修復におけるヒストン修飾と染色体リモデリングの役割の解析

组蛋白修饰和染色体重塑在基因组损伤修复中的作用分析

基本信息

批准号：
19570004
负责人：
園田英一朗
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19570004/
关键词：
DT40 DNA損傷修復ユビキチンヒストン修飾 H2AX UBC13

项目摘要

1.ヒストンH2AXユビキチン化変異株の作製我々は、H2AXのリン酸化部位を欠質した変異株を作製して、リン酸化が組換えに関与していることを示した。同様な方法で、ユビキチン化されるリシン残基(K119)をアルギニンに置換したものを作製した(東北大医学研究科井倉博士との共同研究)。さらに組換え欠損(XRCC3)とH2AX完全欠損は致死になることを利用して、XRCC3/H2AX2重欠損株にユビキチン化欠損H2AXK119Rを導入し、ユビキチン化欠損を条件法で解析できる株を樹立した。現在、以下の方法で様々な細胞の表現型を解析中である。2.変異株のDNA損傷修復能の解析i)感受性試験;放射線、紫外線、カンプトテシン、シスプラチン、MMSなどで処理ii)染色体分析;感受性を示した薬剤で処理した後、分裂期細胞を光学顕微鏡で観察3.UBC13のユビキチン化基質の同定UBC13はH2AX以外にDNA修復に関与する多くの分子をユビキチン化している可能性がある。このユビキチン化基質を探索するために、野生株とUBC13欠損株にDNA損傷をあたえ、細胞から蛋白質を回収する。回収した蛋白を2次元電気泳動で展開し、変異株で欠損する蛋白質を質量分析で解析する。現在、大学院生が国立遺伝研の深川研究室で抗ユビキチン抗体による免疫沈降の予備実験をおこなった。4.クロマチン免疫沈降法を用いた、損傷部位への修復蛋白の集積解析DNA損傷部位周辺にどのような因子が集積しているか、またその周辺のヒストンの修飾状態はどう変化しているかを、I-SCEI制限酵素切断法とクロマチン免疫沈降法を組み合わせて明らかにする。現在I-SCEI切断部位にH2AXおよびコヒーシンタンパク質の一種であるSMC1が集積していることを確かめ、実際にDT40を使った系で2重鎖切断部位に集積するタンパク質が特異的に調べられることがわかった。

1. After H2AX treatment, the acidified part of the plant was used as an acid, the acidified part of the plant was treated as an acid, and the acidified plant was used as a chemical. The acidified plant was used as an indicator. In the same way as the method and the method, the residue (K119) was co-studied by the doctor of the Medical Research Department of Peking University. The XRCC3 was completely deficient in H2AX, the lethal dose was not in full use, the XRCC3/H2AX2 was heavily in arrears, the H2AXK119R was not imported, and the conditional method was used to analyze the growth of the plant. At present, the following methods are in the process of analysis. two。 I) ii analysis of susceptibility, radiation, ultraviolet, radiation, DNA, MMS, and so on. The sensitivity test shows that after the treatment, the mitotic cell optics micrograph examines the 3.UBC13 profile. The chemical base is the same as that of the UBC13 H2AX. The DNA modification is similar to that of the DNA and polymolecules. The wild plant UBC13, the wild plant, the DNA plant, the cell protein, the wild plant, the wild plant. The two-dimensional electrophoresis was carried out, and the protein content of the strain was analyzed by quantitative analysis. At present, the national research institute of the National Institute of Science and Technology, the Department of Anti-virus, Antibody, immune sedimentation, and so on, in the National Research Institute of the National Academy of Sciences. 4. Immuno-sedimentation method was used to analyze the protein set of DNA parts. The factors were analyzed by immuno-sedimentation method and enzyme restriction enzyme digestion of I-SCEI was used. Now that the I-SCEI is cut off, it is necessary to make sure that there are two important parts of the cut-off site, that is, the part of the cut-off site, the part of the I-SCEI, the part of the cut-off part, the part of the cut part, the part of the

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ユビキチン結合酵素UBC13の2重鎖切断修復における役割

泛素结合酶 UBC13 在双链断裂修复中的作用

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
沓掛和弘(分担執筆)(高橋純夫監修;岡山大学生物学教科書作成グループ編));園田英一朗
通讯作者：
園田英一朗

Interplay between DNA polymerases beta and lambda in repair of oxidation DNA damage in chicken DT40 cells.

DNA 聚合酶 beta 和 lambda 在修复鸡 DT40 细胞氧化 DNA 损伤中的相互作用。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
DNA Repair (Amst) 6
影响因子：
0
作者：
Tano K;Nakamura J;Asagoshi K;Arakawa H;Sonoda E;Braithwaite EK;Prasad R;Buerstedde JM;Takeda S;Watanabe M;Wilson SH
通讯作者：
Wilson SH

An essential role for Cdk1 in S phase control is revealed via chemical genetics in vertebrate cells.

DOI：
10.1083/jcb.200702034
发表时间：
2007-07-16
期刊：
JOURNAL OF CELL BIOLOGY
影响因子：
7.8
作者：
Hochegger, Helfrid;Deisuphong, Donniphat;Sonoda, Eiichiro;Sciberi, Alihossein;Rajendra, Eeson;Kirk, Jane;Hunt, Tim;Takeda, Shunichi
通讯作者：
Takeda, Shunichi

Cells deficient in the FANC/BRCA pathway are hypersensitive to plasma levels of formaldehyde