人工転写因子ライブラリーを用いた網羅的遺伝子同定

使用人工转录因子库进行全面基因鉴定

• 批准号: 18018025
• 负责人: 世良 貴史
• 金额: $ 5.06万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18018025/
• 关键词: 遺伝子; 発現制御

これまでに狙い通りの人工転写因子ができることを確認したが、作製したDNA結合部位の、人工転写因子発現ベクター用の改良型プリカーサーへのクローニング効率が現在のところ芳しくない。ライゲーションサンプルの大腸菌への形質転換後得られる形質転換体数がそれほど高くなく、今のところ実験に必要な水準を満たしていない。各メーカーのエレクトロコンピテントセルを試してみたが、市販品のエレクトロコンピテントセルでは満足のいく結果が得られなかった。そこでエレクトロコンピテントセルを自作して、多量の形質転換体を得ることを試みた。また得られたベクターの動物細胞への遺伝子導入を行った。すでに報告されている方法に沿って、動物細胞への遺伝子導入を試みたが、その効率は報告されているものより予想以上に低く、様々な導入条件を検討したが、満足のいくものではなかった。そこで各種メーカーの遺伝子導入試薬を用いて、様々な条件の検討を行ったが、5%以上の遺伝子導入効率を得ることはできなかった。また、従来のエレクトロポーレーション法によっても導入効率の改善は見られなかった。しかし、最近報告された新しい方法に基づくエレクトロポーレーション法を用いると、遺伝子導入を大幅に改善することができた。遺伝子導入に用いるパルス電圧、パルスを掛ける時間および回数等の各種条件を検討し、最終的に再現性よく50%以上の効率で遺伝子導入できることを見出した。

The artificial transcription factor for this purpose is confirmed, and the DNA binding site is controlled. The artificial transcription factor is found in an improved format. The number of physical and qualitative changes in Escherichia coli after the first batch of bacteria is high, and the number of physical and qualitative changes in Escherichia coli after the first batch of bacteria is high. The results of the test were obtained from the test results of each product. A lot of people are trying to change their behavior. The introduction of gene into animal cells was carried out. The method for introducing gene into animal cells is described below. The introduction rate of all kinds of genes is more than 5% in the middle of the study. The improvement of the import efficiency of the new technology is also discussed. Recently, new methods have been reported to improve the quality of products. Various conditions such as voltage, time, and number of cycles are discussed for gene introduction, and the final reproducibility is more than 50% of the efficiency of gene introduction.