人工転写因子ライブラリーを用いた網羅的遺伝子同定

使用人工转录因子库进行全面基因鉴定

• 批准号: 16012230
• 负责人: 世良 貴史
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16012230/
• 关键词: 遺伝子発現; 人工転写因子; 人工DNA結合タンパク質; ライブラリー; セレクション

まず、人工転写因子ライブラリー発現ベクターのプリカーサーを作成した。このベクターに人工転写因子遺伝子を導入した発現ベクターを作成し、このベクターでヒト由来細胞HEK293を形質転換し、この遺伝子が効率よく発現されることをウェスタンブロットで確認した。また、人工転写因子ライブラリー作成に必要な768本のDNAフラグメントのデザインを完了した。しかし、実際に支給された研究費ではライブラリー作成に必要なすべてのDNAオリゴマーを購入できないので、まずグアニン(G)が豊富な塩基配列を認識できるように(ヒトのプロモーター配列はGが豊富な場合が多い)、全体の4分の1の192本分のDNAフラグメント作成用のDNAオリゴマーを購入し、(部分的な)ジンク・フィンガー・ドメイン・ライブラリーを作成した。このライブラリーを発現ベクターのプリカーサーに導入したもので大腸菌を形質転換し、生成してきた50個以上のコロニーからDNAベクターを単離し、各々の塩基配列を決定したところ、フィンガー・ドメインがランダムにアッセンブルされて、狙い通りの(部分的だが)人工転写因子ライブラリーができることを確認した。こうして得られた人工転写因子ライブラリーをヒト由来細胞に遺伝子導入したが、1回目のセレクション操作における標的の形質を示した細胞の割合が極端に低かったので、現在、遺伝子導入時の実験条件の最適化を行なっているところである。

This is the first time that a user has created an image of the image. The artificial gene was introduced into HEK293 cells, and the gene efficiency was confirmed. This is the first time that we have ever had a chance to create a DNA sequence. In the meantime, the research expenses incurred are necessary for the production of DNA and the acquisition of DNA. The DNA sequence of all 4 of the 192 sub-DNA sequences was purchased, and some of the sequences were created. The detection of the presence of Escherichia coli in the introduction of the virus, the generation of more than 50 viruses, the separation of DNA, the determination of the sequence of each gene, the identification of the human factor. The artificial transcription factor was obtained by optimizing the conditions for gene introduction into cells.