環境ゲノムからのバイオナノマグネタイト合成遺伝子群の探索

从环境基因组中寻找生物纳米磁铁矿合成基因

基本信息

  • 批准号:
    18031010
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.93万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2006 至 2007
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

比較的低温で解離し、高いシャペロン活性を示す分裂酵母Schizosaccharomyces pombe 由来SpHsp16.0のN末端領域に多く存在するフェニルアラニンに注目し、アラニンに変異させた変異体の会合状態とシャペロン活性を評価することで、sHspのN末端領域の役割を考察した。 SpHsp16.0のN末端5箇所のフェニルアラニンが存在する。 QuikChange Site-Directed Mutanogenesis Kitを用いて、それぞれアラニンに置換したF6A, F7A。F9A, F17A, F20Aを作成し、機能と構造を解析した。Wild typeに比べ変異体はCS凝集抑制効果、疎水性領域が減少しており、特にF7A、F17Aは顕著に変異による影響が見られた。また、HPLCを用いたサイズ排除クロマトグラフィーにより、Wild typeおよび変異体SpHsp16.0の温度依存的なオリゴマーの解離を測定した。 25℃ではWild typeと変異体の溶出時間は同じであったが、変異体は35℃で低分子側にピークが移行していた。N末端領域のフェニルアラニンに変異を入れる事でSpHsp16.0のオリゴマー構造が不安定になり、低温で解離するようになると考えられる。SpHsp16.0のN末端の疎水性領域は分子シヤペロン活性、疎水性領域の維持に重要な役割を果たし、またN末端の疎水性がオリゴマーの形成にも関与していることが示唆された。また、菌体内に磁性微粒子を形成する磁性細菌Magnetospirillum magneticum AMB-1に存在するsHsol8.0を材料とし、sHspとしての諸性質、及びその分子シャペロン活性について解析した。 sHspl8.0は室温25℃では大きな複合を形成しているが、30℃から38℃にかけて解離の過程を示すブロードなピークを示し、45℃では完全に解離している事が測定された。sHspl8.0はGFPに対してはその自発的なrefoldingの抑制を示さなかった。しかし、CSに対しては熱凝集を抑制し分子シャペロン活性を示した。以上の結果から、sHspl8.0は一般的なsHspとしての機能を示す分子シャペロンである事が示された。
Comparison of low temperature dissociation, high temperature dissociation activity, high temperature dissociation activity, high temperature dissociation activity SpHsp16.0 has five N-terminal sites. QuikChange Site-Directed Mutanogenesis Kit is available in F6A, F7A. F9A, F17A, F20A are made, function and structure are analyzed. Wild type is different from CS aggregation inhibition effect, water field is reduced, special F7A, F17A is different from CS aggregation inhibition effect. HPLC was used to determine the temperature dependence of SpHsp16.0 and its dissociation. The dissolution time of Wild type at 25℃ is different from that at 35℃, and the low molecular side is different from that at 35℃. The N-terminal region is characterized by instability and dissociation at low temperatures. The N-terminal water domain of SpHsp16.0 plays an important role in molecular activity and maintenance of the water domain. The magnetic bacteria Magnetospirillum magneticum AMB-1, which forms magnetic particles in bacteria, exists in sHsol8.0, materials, sHsp, and molecular properties. sHspl8.0 At room temperature 25℃, the formation of large complex, 30℃, 38℃, the process of dissociation was shown, and 45℃, the complete dissociation was measured. sHspl8.0 is the first time that GFP has been released. C-S-T-T- The above results show that sHsp8.0 is a general function of the molecule.

项目成果

期刊论文数量(17)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
分裂酵母Schizosaccharomyces pormbe由来Hsp40,Hsp70及びHsp104の発現,精製及び機能解析
裂殖酵母 Hsp40、Hsp70 和 Hsp104 的表达、纯化和功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    金 南希 杉野 智加;阿部 哲也;養王田 正文
  • 通讯作者:
    養王田 正文
分裂酵母Schizsacchomyces pomhe由来sHspの変性タンパク質との相互作用
裂殖酵母裂殖酵母 sHsp 与变性蛋白质的相互作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    吉成 由貴子 阿部 哲也;杉野 智加;広瀬 麻耶;飯塚 怜;清水 雅史;養王田 正文
  • 通讯作者:
    養王田 正文
分裂酵母Schizosacoharemyces pombe由来sHspの変性タンパク質との相互作用
裂殖酵母 粟酒裂殖酵母 sHsp 与变性蛋白质的相互作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    吉成 由貴子 杉野 智加;広瀬 麻耶;飯塚 怜;清水 雅史;養王田 正文
  • 通讯作者:
    養王田 正文
Contribution of the C-terminal region to the thermostability of the archaeal group II chaperonin from Thermococcus sp. strain KS-1
  • DOI:
    10.1007/s00792-006-0519-y
  • 发表时间:
    2006-05
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.9
  • 作者:
    Takao Yoshida;Taro Kanzaki;R. Iizuka;Toshihiro Komada;T. Zako;R. Suzuki;T. Maruyama;M. Yohda
  • 通讯作者:
    Takao Yoshida;Taro Kanzaki;R. Iizuka;Toshihiro Komada;T. Zako;R. Suzuki;T. Maruyama;M. Yohda
Structure of thiocyanate hydrolase: A new nitrile hydratase family protein with a novel five-coordinate cobalt(III) center
  • DOI:
    10.1016/j.jmb.2006.12.011
  • 发表时间:
    2007-03-09
  • 期刊:
  • 影响因子:
    5.6
  • 作者:
    Arakawa, Takatoshi;Kawano, Yoshiaki;Odaka, Masafumi
  • 通讯作者:
    Odaka, Masafumi
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