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古細菌のシャペロニンを用いたGroupII型シャペロキンの構造と反応機構の解明

利用古菌伴侣蛋白阐明 II 族型伴侣蛋白的结构和反应机制

基本信息

批准号：
10172236
负责人：
養王田正文
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Thermococcus KS-1のシャペロニンがMgとATPが存在する条件でFilament構造を形成することを明らかにした.GroupII型シャペロニンと協調して機能すると考えられているPrefoldinの遺伝子をThermococus KS-1から単離した.Prefoldinは複数のサブユニットから構成されているといわれているが,古細菌ではその実体は明らかではない.得られた遺伝子の周囲には候補となる遺伝子が複数存在した.また,オペロンを形成していない可能性があるので,本遺伝子を大腸菌で生産し,精製して抗体を作成した.この抗体を用いた免疫沈降を行いPrefoldinの単離を行う予定である.様々な超好熱性古細菌のゲノム解析の結果,超好熱性古細菌では,良く知られている分子シャペロンとしてはシャペロニンとsHspのみが存在することが分かっている.そこで,Thermococcus KS-1のsHsp遺伝子断片をPCRで増幅し,その配列を基にRACE法により全長遺伝子を単離した.この遺伝子大腸菌に組み込み発現した.発現したsHspは耐熱性であり70度30分間の処理で大腸菌由来の他の蛋白質はほぼ完全に除去された.現在,その機能と特性を解析している.

Thermococcus KS-1 and Mg and ATP exist under the condition that Filament structure is formed. Group II type of Filament structure is formed under the condition that Filament structure is formed under the condition that Mg and ATP exist under the condition that Filament structure is formed under the condition that Mg and ATP exist under the condition that Filament structure is formed under the condition that Mg and ATP exist. The number of candidates for the position of the candidate is greater than that of the candidate. The possibility of producing E. coli and the purification of antibodies. The antibody is used in the Prefoldin As a result of the analysis of superthermophilic archaea, it is well known that superthermophilic archaea exist in different molecular species. In addition, the sHsp gene fragment of Thermococcus KS-1 was amplified by PCR and sequenced by RACE. This is the first time that E. coli has been detected. The heat resistance of the bacteria was completely eliminated by 70 ℃ 30 min treatment. Now, the function and characteristics of the analysis.