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Group II型シャペロニン及びその補因子プレフォルディンの構造解析

II组伴侣蛋白及其辅因子前折叠蛋白的结构分析

基本信息

批准号：
13033008
负责人：
養王田正文
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、超好熱性古細菌由来Group II型シャペロニン、プレフォルディンを用いて、構造学的にGroup II型シャペロニンのBuild-in Lid開閉機構及びシャペロニンとプレフォルディンの協調機構の解明を目的に研究を行っている。様々なヌクレオチド存在下で、野生型αシャペロニンにproteinase Kを作用させたところ、ATP, AMP-PNP存在下では分解が妨げられた。また、アピカルドメインの先端にTrp残基を導入した変異体を作成し、構造変化をその蛍光特性から追跡した。その結果、ATP, AMP-PNPと結合したシャペロニンにおいて蛍光の増大が観測された。これらの結果は、ATPとの結合に伴い、Built-in Lidが閉じることを示唆するものだと思われる。一方、リフォールディング活性を示さない変異体αシャペロニンを用いた際には、この構造変化を示す結果は得られなかった。Built-in LidのDeletion Mutantを作成したところ、変性タンパク質結合能は有していたが、タンパク質フォールディング活性は失われていた。このDeletion Mutantの結晶を得ることに成功した。プレフォルディンはWild型の結晶から良いDiffractionが得られないことから、βサブユニットのC末8残基欠失体の結晶化を試み20%PEG 4000、0.1M HEPES(pH7.7)の条件で結晶が得られた。しかし、この結晶からも構造解析に使える反射を得ることは出来なかった。シャペロニンとの共結晶の作成を試みたが結晶は得られていない。また、酵母由来プレフォルディンの各サブユニットの発現系を作成し、全てのサブユニットを組み込んだ同時生産系を構築した。

The origin of super-thermal archaea is studied in the field of structure, Build-in Lid opening and closing mechanism, and coordination mechanism of super-thermal archaea In the presence of the wild type α-protein, protease K acts on the protein and ATP and AMP-PNP. The first Trp residue was introduced into the structure and the second Trp residue was synthesized. The results, ATP, AMP-PNP and the combination of ATP, AMP-PNP and PNP were analyzed. The result of this is that ATP is combined with Lid, Built-in Lid is closed, and Lid is closed. A party, a party Built-in Lid Deletion Mutants are made from different kinds of materials. The Deletion Mutant was successfully crystallized. Crystallization of C terminal 8 residue in PEG4000, 0.1M HEPES(pH7.7) was obtained under the conditions of 20%PEG 4000 and 0.1M HEPES(pH7.7).しかし、この结晶からも构造解析に使える反射を得ることは出来なかった。The preparation of co-crystals in the process of crystallization was studied. The development system of the yeast and yeast is established, and the production system of the yeast and yeast is constructed simultaneously.