プレフォルディンと葬型シャペロニンによるタンパク質フォールディング機構の解明

前折叠蛋白和陪葬蛋白阐明蛋白质折叠机制

• 批准号: 15032212
• 负责人: 養王田 正文
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15032212/
• 关键词: シャペロニン; シャペロン; プレフォルディン; 古細菌; 超好熱性菌; フォールディング; 協調機構; 変性蛋白質

1.Thermococcus sp. strain KS-1には2種類のシャペロニン(αとβ)が存在し、至適温度や熱耐性に違いがある。ドメイン交換体を作成して耐熱性などを解析した結果、Equatrial domainにあるC末領域が熱安定性の違いに関与することを明らかにした。2.T.KS-1由来シャペロニンの蛋白質フォールディングに対するAlF_xやBeF_xの効果を解析し、ADP-BeF_xが結合した状態でBuilt-in Lidが閉じることを明らかにした。この結果は、真核生物の2型シャペロニンで得られた結果とは異なり、真核型と古細菌型での反応機構が違うことを示している。3.Pyrococcus horikoshii OT3由来プレフォルディン(PhPFD)とThermococcus sp.strain KS-1の2つのシャペロニンとの相互作用をビアコアにより解析したところ、βは、αに比べ約8倍の結合力を示した。この違いは、PhPFDの結合部位と考えられている頂点ドメインの250と256残基目のアミノ酸の電荷の違いによるものであることを証明した。この結合能の違いとタンパク質受け渡し速度の違いに相関があることを発見した。4.PhPFDのβサブユニットのN末欠失変異体を作成し、C末と同様にN末もシャペロニンとの相互作用に重要であることを明らかにした。

1. Thermococcus sp. strain KS-1 has two kinds of temperature tolerance (α and β). The heat resistance of the heat exchanger is analyzed. The heat resistance of the heat exchanger is analyzed. The heat resistance of the heat exchanger is analyzed. 2. T. KS-1 is the result of the analysis of the protein content of the protein in the protein content of the protein. The results of this study are as follows: (1) The eukaryote type 2 is different from the eukaryote type 2;(2) The eukaryote type 2 is different from the eukaryote type 2; and (3) The eukaryote type 2 is different from the eukaryote type 2. 3. Pyrococcus horikoshii OT3 has a binding force of about 8 times higher than that of Thermococcus sp.strain KS-1 due to the interaction between PFD and KS-1. The binding sites of these residues were examined at 250 and 256 residues, and the charge of these residues was examined at 250 and 256 residues. The combination of energy and speed is related to each other. 4. The interaction between PFD and N terminal loss is important.

项目成果

Iizuka R, So S, Inobe T, Yoshida T, Zako T, Kuwajima K, Yohda M.: "Role of the helical protrusion in the conformational change and molecular chaperone activity of the archaeal group II chaperonin."J Biol Chem.. (in press). (2004)

Iizuka R, So S, Inobe T, Yoshida T, Zako T, Kuwajima K, Yohda M.：“螺旋突出在古菌 II 类伴侣蛋白的构象变化和分子伴侣活性中的作用。”J Biol Chem..（

Shomura Y, Yoshida T, Iizuka R, Maruyama T, Yohda M, Miki K.: "Crystal structures of the group II chaperonin from Thermococcus strain KS-1:steric hindrance by the substituted amino acid.and inter-subunit rearrangement between two crystal forms."J Mol Biol

Shomura Y、Yoshida T、Iizuka R、Maruyama T、Yohda M、Miki K.：“来自热球菌菌株 KS-1 的 II 族伴侣蛋白的晶体结构：取代氨基酸的空间位阻。以及两个晶体之间的亚基间重排

Iizuka R, Yoshida T, Shomura Y, Miki K, Maruyama T, Odaka M, Yohda M.: "ATP binding is critical for the conformational change from an open to closed state in archaeal group II chaperonin."J Biol Chem.. 278・45. 44959-44965 (2003)

Iizuka R、Yoshida T、Shomura Y、Miki K、Maruyama T、Odaka M、Yohda M.：“ATP 结合对于古菌 II 组伴侣蛋白从开放状态到封闭状态的构象变化至关重要。”J Biol Chem.. 278・45。44959-44965（2003）

Usui K, Hatipoglu OF, Ishii N, Yohda M.: "Role of the N-terminal region of the crenarchaeal sHsp.StHsp14.0,in thermal-induced disassembly of the complex and molecular chaperone activity."Biochem Biophys Res Commun. 315・1. 113-118 (2004)

Usui K、Hatipoglu OF、Ishii N、Yohda M.：“颅缝 sHsp.StHsp14.0 的 N 末端区域在复合物和分子伴侣活性的热诱导分解中的作用。”Biochem Biophys Res Commun。・1。113-118（2004）

Ishii D, Kinbara K, Ishida Y, Ishii N, Okochi M, Yohda M, Aida T.: "Chaperonin-mediated stabilization and ATP-triggered release of semiconductor nanoparticles."Nature. 423・6940. 628-632 (2003)

Ishii D、Kinbara K、Ishida Y、Ishii N、Okochi M、Yohda M、Aida T.：“伴侣蛋白介导的半导体纳米颗粒的稳定和 ATP 触发的释放”。《自然》423·6940（2003 年）。