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プレフォルディンとII型シャペロニンによるタンパク質フォールディング機構の解明

前折叠蛋白和 II 型伴侣蛋白阐明蛋白质折叠机制

基本信息

批准号：
14037216
负责人：
養王田正文
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はII型シャペロニンとそのCo-chaperoneであるプレフォルディンによるタンパク質フォールディング機構の解明を目標に研究を進めている。具体的には超好熱性古細菌Pyrococcus horikoshii由来シャペロニン(PhCPN)及びプレフォルディン(PhPFD)を組み換え体として大腸菌で生産し、in vitroで機能解析を行っている。本年度はプレフォルディンの基質及びシャペロニン結合部位の同定、シャペロニンとの協調機構に関する研究を行った。メタン生成古細菌由来プレフォルディンのX線結晶構造から各サブユニットのN及びC末端が変性タンパク質の結合に関与していることが示唆されている。そこで、PhPFDの各サブユニットの末端を除去し変異体を作成し、機能への寄与を解析した。PhPFDβC末8残基欠損体で基質タンパク質結合能力が低下し、5残基欠損体では低下が見られなかった事から、PhPFDβのC末6-8残基部分の存在が、基質タンパク質をアレストする認識に、重要であることが示された。また、βのN末欠損体でも基質タンパク質結合能力が低下した。PhPFDαは、末端部分欠損体では基質タンパク質結合能力が低下しないが、コイル構造部分まで深く欠失させた変異体(tc24tn17α)で結合能が失われていた。また、αC末8残基欠損、βC末5残基欠損したPhPFDは、基質タンパク質結合能の低下に影響がみられなかったがシャペロニンへの結合能が低下した。PhCPNとPhPFDとの協調機構を変性IPMDH(Thermus thermophilus由来イソプロピルリンゴ酸脱水素酵素)のリフォールディングにより解析したところ、PhCPN単独よりもPhPFDが共存した場合に高い効率でリフォールディングしたことから、PhPFDとPhCPNが協調してタンパク質フォールディングを行っていることが証明された。

I type II type シャペロニンとそのCo-chaperone であるプレフォルディンによるタンパクquality フォールディング INSTITUTION ANALYSIS OBJECTIVES に RESEARCH FUTURE めている. Specifically, the superthermophilic archaea Pyrococcus horikoshii originates from PhCPN (PhCPN) and Pyrococcus horikoshii (PhPFD), and is produced by coliform bacteria, in In vitro functional analysis is done. This year's research on the dosing of the はプレフォルディンの matrix and the びシャペロニン binding site, and the シャペロニンとの coordinating organization. The origin of メレフォルディンのX-ray crystal structure サブユニットのThe N and C-terminal が変性タンパク性の合恫关 and the していることが说憆されている.そこで, PhPFD each サブユニットの terminal removal し変 variant を creation し, function への sent and を analysis した. The 8-residue residue at the end of PhPFDβC is defective and the binding ability of the substrate is reduced. The 5-residue residue is defective and the binding ability is reduced. , The existence of the 6-8 residues at the end of C of PhPFDβ, the recognition of the matrix タンパクquality, and the importance of it.また、βのN-terminal damage body でもMatrix タンパク ESSENTIAL BINDING ABILITY is low した. PhPFDα, the terminal part is damaged, the matrix material binding ability is low, the body is damaged, and the binding ability is low. The structural part is a different type of variant (tc24tn17α) and a binding energy.また,αC-terminal 8 residues are missing,βC-terminal 5 residues are missing,PhPFDは,matrix タンパクThe lowering of the binding energy of the material affects the lowering of the binding energy of the material. PhCPN and PhPFD are coordinating organizations and IPMDH (Thermus Origin of thermophilus The coexistence of PhCPN and PhCPN The occasion is high and the efficiency is high, PhPFD and PhC PNがcoordinationしてタンパクqualityフォールディングを行っていることがproveされた.