ミリスチル化タンパク質の生体内モニタリングとその定量解析法の確立
肉豆蔻酰化蛋白体内监测及其定量分析方法的建立
基本信息
- 批准号:18038022
- 负责人:
- 金额:$ 2.24万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2006
- 资助国家:日本
- 起止时间:2006 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、ゼブラフィッシュをモデル動物として、受精卵(1細胞)からの発生・分化過程に関与するタンパク質の脂肪酸修飾を触媒するN-ミリスチル転移酵素(NMT)に焦点を絞り、ミリスチル化タンパク質の生体内モニタリングとその定量解析法の確立を目指した。そこでまず、ゼブラフィッシュの初期発生過程におけるNMT遺伝子ならびにミリスチル化関連酵素(MetAP)についての生体内発現局在をホールマウントin situハイブリダイゼーション(WISH)法で調べた。その結果、受精後24時間の胚ではNMT遺伝子は頭部の内部に発現が見られるのに対して、MetAP遺伝子は頭部表層および全身に発現していた。さらに、受精後48時間の胚では、両遺伝子は頭部においてほぼ同様に発現しており、全身に発現していたMetAP遺伝子は消失していた。また、市販の抗ヒトNMT抗体を用いたホールマウント免疫組織染色を行った。その結果、NMT1タンパク質は受精後1日(dpf)から頭部および体幹の表層部、卵黄嚢の後端部、眼部、膜鰭に認められ、2〜3dpfでは孵化腺、胸鰭および膜鰭で発現していた。さらに、4dpf以降では内耳および体表の神経丘、ならびに眼周辺部でも発現が認められた。一方、エストラジオールを曝露した個体では血島でのNMTタンパク質の発現が増大していた。以上の結果から、NMTタンパク質はゼブラフィッシュの発生過程において広範な組織で発現し、感覚器でも発現していることが新たに明らかになった。
This study aims to establish a quantitative analysis method for the fatty acid modification of a fertilized egg (1 cell) during its development and differentiation. In the early stages of development, NMT gene expression and MetAP gene expression are regulated by WISH method. The results showed that the NMT gene was found in the head and the MetAP gene was found in the head and the whole body at 24 hours after fertilization. 48 hours after fertilization, the embryo and the embryo disappear in the head and the whole body Anti-NMT antibodies were used to detect the presence of anti-NMT antibodies. NMT1:1 day after fertilization (dpf): head, trunk, rear end of yolk, eye, membranous fin, hatching gland, pectoral fin, membranous fin, hatching gland, pectoral fin, membranous fin, etc. In the evening, 4dpf, the inner ear and the body surface of the brain, the eye and the eye are all recognized. The development of NMT quality in the exposed individuals has increased. The above results show that the NMT has a high quality, and the development process of the NMT has a high quality.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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