魚類用ユニバーサル発現ベクターの開発

鱼类通用表达载体的开发

• 批准号: 14560148
• 负责人: 田丸 浩
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14560148/
• 关键词: 遺伝子発現; プラスミドベクター; プロモーター; イリドウイルス; 蛍光タンパク質; ゼブラフィッシュ; 受精卵; インジェクション

本研究では、イリドウイルスの幅広い宿主域を利用して、そのプロモーターを組み込んだ発現ベクターを作成することで、様々な魚種に利用可能な発現解析系を構築することを試みた。すなわち、既存プロモーターに見られる魚種特異性の問題が解決するものと思われ、得られたイリドウイルスプロモーターは、これまで医学や理学の分野で幅広く用いられ莫大な成果をもたらしてきたSV40あるいはCMVプロモーターと同等の役割を果たすと予想される。本年度は、(1)イリドウイルスプロモーターのクローン化、(2)蛍光タンパク質(Green Fluoresent Protein : GFP)とプロモーターを含むプラスミドの構築、(3)ゼブラフィッシュ受精卵へのインジェクション効率の検討、の3つの点に関して検討した。(1)イリドウイルス由来のATPase遺伝子の上流域994bp(あるいは439bp)およびMCP遺伝子の上流域1411bpをPCRで増幅し、両遺伝子のプロモーターの単離に成功した。また、マダイβ-アクチン遺伝子の下流域352bpについても同様の方法でクローニングした。(2)上記のイリドウイルス・プロモーター領域およびマダイβ-アクチンUTR領域を組み合わせて、GFPをレポーター遺伝子とする4種類のプラスミドを構築した。すなわち、(i)pEGFP/n:プロモーターのないもの、(ii)pEGFP/ATP044:ATPaseプロモーター(994bpの439bp領域)、(iii)pEGFP/ATP099:ATPaseプロモーター(994bp領域)、(iv)pEGFP/MCP141:MCPプロモーター(1411bp領域)。(3)ゼブラフィッシュ受精卵へのインジェクション効率を算出するために、インジェクションするDNA溶液の濃度およびGFP発現効率を指標とした。コントロールとして、アフリカツメガエルEF-1αプロモーターにGFPが連結した環状プラスミドを用いた。その結果、80ng/μl濃度で33%のGFP発現効率がみられた。

In this study, we tried to construct a possible discovery analysis system for species by using the host domain of the species. The problem of species-specific identification of existing species is solved by thinking about how to identify them and how to identify them in the field of medical science. This year, we will focus on: (1) the development of Green fluorescent Protein (GFP) and green fluorescent protein (GFP),(2) the construction of green fluorescent protein (GFP) and green fluorescent protein (GFP),(3) the investigation of the efficiency of green fluorescent protein and green fluorescent protein, and (4) the investigation of the relevant points. (1)The upstream region of the ATPase gene from which the protein was derived was 994bp(439bp) and the upstream region of the MCP gene was 1411bp. PCR amplification was increased and the isolation of the ATPase gene from the protein was successful. 352bp in the lower part of the river. (2)In this paper, we construct four kinds of software modules: software module, software module, etc. pEGFP/ATP044:ATPase (994bp and 439bp domain),(iii)pEGFP/ATP099:ATPase (994bp domain),(iv)pEGFP/MCP141:MCP (1411bp domain). (3)The concentration of DNA in the solution and the GFP production rate were calculated. For example, if the GFP is linked to the EF-1 alpha, the GFP is linked to the EF-1 alpha. The results showed that the GFP expression rate was 33% at 80ng/μl.

项目成果

田丸 浩: "ゼブラフィッシュによるトキシコゲノミクス研究"バイオサイエンスとバイオインダストリー. 61・1. 31-34 (2003)

Hiroshi Tamaru：“使用斑马鱼的毒性基因组学研究”《生物科学与生物工业》61・1（2003）。