ミリスチル化脂質修飾を標的とした個体レベルの時空間モニタリングとその定量解析
针对肉豆蔻酰化脂质修饰的个体水平时空监测和定量分析
基本信息
- 批准号:19021022
- 负责人:
- 金额:$ 3.2万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2007
- 资助国家:日本
- 起止时间:2007 至 2008
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、ゼブラフィッシュをモデル動物として、受精卵(1細胞)からの発生・分化過程という「時間的・空間的な動態」におけるミリスチル化脂質修飾酵素ならびにその標的タンパク質を介した時空間動態の定量的解析法の確立を目指した。最終年度となる今年度は、ミリスチン酸(myr)-グリシン(Gly)残基に対する抗体を作製し、ミリスチル化ペプチドに対する抗体の免疫学的力価の検討を行った。その結果、50ng以上のミリスチル化ペプチドに対して直線的な相関が得られた。さらに、大腸菌発現系を用いてゼブラフィッシュzNMT1遺伝子の組換え体酵素を精製し、標的ペプチドに対するミリスチル化の反応産物を質量分析器を用いてMyr付加の有無を検討した。その結果、組換えzNMT1は標的ペプチドをミリスチル化し、ミリスチル化ペプチドに予想通りの分子量の変動が確認された。最後に、ゼブラフィッシュ遺伝子発現系を用いて蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)によるタンパク質間相互作用について検討を行った。当研究室で開発したpZexベクターならびに全身細胞で発現するpXIを組み合わせて、孵化腺細胞におけるFRETを観察した。その結果、受精後24-48時間において強いFRETが観察され、高等動物におけるタンパク質間相互作用解析が可能となった。今後は、発現が困難である膜タンパク質についてのミリスチル化とタンパク質間相互作用解析を組み合わせることで、タンパク質ミリスチル化が関与する生命現象の解明を進めていく予定である。
In this study, we established an analytical method for quantitative analysis of the development and differentiation of fertilized eggs (1 cell) in animals, and the temporal and spatial dynamics of lipid modifying enzymes. This year, the study of antibody production and immune response to myr-Gly residues was conducted. The results of the above 50ng and above are as follows: In addition, E. coli production system is used to refine, target, select, and analyze the presence and absence of Myr protein. As a result, the molecular weight variation of ZNMT1 was confirmed by the molecular weight variation of ZNMT1. Finally, a new generation system of optical resonance (FRET) is proposed to investigate the interaction between particles. When the laboratory was opened, pZex was detected and pXI was detected in whole body cells. The results, 24-48 hours after fertilization, were observed by FRET, and the analysis of cytoplasmic interactions in higher animals was possible. In the future, it will be difficult to understand the relationship between life phenomena and the analysis of mass-to-mass interactions.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
ゼブラフィッシュ初期発生過程における、N-myristoyltransferase 1の発現解析
N-肉豆蔻酰转移酶1在斑马鱼早期发育过程中的表达分析
- DOI:
- 发表时间:2009
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:中谷肇;秋山真一;三宅英雄;田丸浩
- 通讯作者:田丸浩
ゼブラフィッシュを用いたタンパク質ミリスチル化の時空間的解析とその定量法の開発
斑马鱼蛋白质十四烷基化的时空分析及其定量方法的开发
- DOI:
- 发表时间:2008
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:中谷肇;秋山真一;三宅英雄;田丸浩
- 通讯作者:田丸浩
ゼブラフィッシュ遺伝子発現系を用いたミリスチル化タンパク質のバイオイメージンク
使用斑马鱼基因表达系统对肉豆蔻酰化蛋白进行生物成像
- DOI:
- 发表时间:2008
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:秋山真一;石川文啓;三宅英雄;田丸 浩
- 通讯作者:田丸 浩
ゼブラフィッシュNMT1遺伝子ノックダウンによる変動遺伝子群の解析
斑马鱼 NMT1 基因敲低分析可变基因组
- DOI:
- 发表时间:2008
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:岩田彩野;秋山真一;田丸 浩
- 通讯作者:田丸 浩
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13770064 - 财政年份:2001
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