非天然アミノ酸含有タンパク質の無細胞及び細胞モデル系での発現
非天然アミノ酸含有タンパク質の無細胞及び細胞モデル系での発現
批准号:
18048031
负责人:
大槻 高史
金额:
$2.11万
依托单位:
依托单位国家:
日本
项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份:
2006
资助国家:
日本
项目状态:
已结题
起止时间:
2006 至 2007
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生命機能の再構成という目において、蛋白質生合成系の役割は大きい。本研究では、蛋白質へ非天然アミノ酸を導入する技術の開発を通じて、蛋白質合成の分子基盤の理解と、人工的な細胞機能の再構築を目指す。具体的には、非天然アミノ酸含有蛋白質合成系をtRNAや翻訳因子の改良により更に効率化し、無細胞系及びモデル細胞系で利用することを目的とする。本年度は、以下の項目に取り組んだ。(1)改良した合成システムによる新規な人工蛋白質の創製前年度に改変を行ったEF-Tu、及び、開発した4塩基コドン用tRNAにより、以下の(i).(ii)を試みた。(i)従来取り込み効率の低かった非天然アミノ酸の蛋白質への導入:改変EF-Tuを用いることにより これまでほとんど蛋白質へ導入できなかった1-pyrenylalanineの導入が可能になったという結果を前年度に得ている。このような例を更に数例調べ、導入効率の極めて低かった2-anthraquinonylalanineおよび1-pyrenylalanineの効率的な導入が可能になったことを明らかにした。これらの結果および前年度の結果は本年度11月にJ.Am. Chem.Soc誌に掲載された。(ii)蛋白質への複数種の非天然アミノ酸の同時導入:4塩基コドン用に開発した高性能なtRNAを用いて1つの蛋白質に複数種の非天然アミノ酸の同時導入を試みた。その結果、3種類の非天然アミノ酸の同時導入が可能になった。(2)細胞中での非天然アミノ酸含有蛋白質発現上の高効率非天然蛋白質発現系を細胞内に導入し、その中で蛍光ラベル蛋白質を合成させることを目指した。細胞としては哺乳動物細胞を用いた。現在のところ、細胞内への蛍光アミノアシルtRNAの導入法の開発途上であり、わずかながら導入できることが認められた。今後さらに導入法を最適化し、蛍光アミノアシル化tRNAが細胞内翻訳系で用いられて蛍光ラベル蛋白質の産生に結びつくことを確認したい。
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非天然アミノ酸の導入による蛋白質の蛍光ラベル法とその応用
引入非天然氨基酸的蛋白质荧光标记及其应用
DOI:
--
发表时间:
2006
期刊:
蛋白質核酸酵素 51・5
影响因子:
--
作者:
[宍戸昌彦, 瀧真清, 大槻高史, 芳坂貴弘]
通讯作者:
芳坂貴弘
Delivery of dsRNA with lactic acid bacteria for RNA interference
用乳酸菌递送 dsRNA 进行 RNA 干扰
DOI:
--
发表时间:
2007
期刊:
影响因子:
--
作者:
[A. Kuwahara, M. Arita, M. Sisido and T. Ohtsuki]
通讯作者:
M. Sisido and T. Ohtsuki
DOI:
10.1042/bj20060781
发表时间:
2006-10
期刊:
The Biochemical journal
影响因子:
--
作者:
[M. Sakurai;Yoh‐ichi Watanabe;Kimitsuna Watanabe;T. Ohtsuki]
通讯作者:
M. Sakurai;Yoh‐ichi Watanabe;Kimitsuna Watanabe;T. Ohtsuki
Design of carrier tRNAs and selection of four-base codons for efficient incorporation of various nonnatural amino acids into proteins in Spodoptera fruaiperda 21 (Sf21) insect cell-free translation system
载体 tRNA 的设计和四碱基密码子的选择,用于将各种非天然氨基酸有效掺入 Spodoptera fruaiperda 21 (Sf21) 昆虫无细胞翻译系统中的蛋白质中
DOI:
--
发表时间:
2006
期刊:
J.Biosci.Bioeng. 102
影响因子:
--
作者:
[Taki, M., Tokuda, Y., Ohtsuki, T., Sisido, M.]
通讯作者:
M.
生細胞内における蛋白質への位置特異的な蛍光基導入法の開発
开发活细胞蛋白质位置特异性荧光基团引入方法
DOI:
--
发表时间:
2007
期刊:
影响因子:
--
作者:
[増田一晶, 根木慧史, 大槻高史, 穴戸昌彦]
通讯作者:
穴戸昌彦
共 31 条
Photochemical internalization of mRNAs
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批准号:22K19895
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项目类别:Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
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资助金额:$4.16万
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财政年份:2022
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
拡張型蛋白質合成系を含む細胞システムの構築
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批准号:20034036
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项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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资助金额:$2.05万
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财政年份:2008
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
RNAi創薬を目指したRNAデリバリー技術の開発
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批准号:20015032
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项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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资助金额:$5.5万
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财政年份:2008
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
人工核酸によるRNAの検出と精製
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批准号:19021034
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项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
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资助金额:$3.07万
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财政年份:2007
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
生細胞中での蛋白質の部位特異的蛍光標識法の開発
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批准号:17750162
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项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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资助金额:$2.3万
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财政年份:2005
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
伸長因子EF-TuによるTアームを欠くtRNAの認識機構
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批准号:13780481
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项目类别:Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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资助金额:$1.54万
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财政年份:2001
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
NMRによるミトコンドリアtRNAの立体構造解析
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批准号:97J07014
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项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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资助金额:$0.58万
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财政年份:1998
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负责人:大槻 高史
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依托单位:
海外基金