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細菌2成分性膜孔形成毒素の「超チャネル」の構造と形成機構

细菌双组分成孔毒素“超级通道”的结构及形成机制

基本信息

批准号：
18054003
负责人：
神尾好是
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Shokei Gakuin College (2007)Tohoku Gakuin University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1. ヒト多型核白血球膜の不溶性膜画分(DRM)、ラフト上における黄色ブドウ球菌のロイコシジン膜孔オリゴマーの形成:黄色ブドウ球菌のロイコシジン(Luk)はLukSとLukFの2成分が共同してヒト多型核白血球(HPMNL)、単球、マクロファージなどを崩壊する。HPMNLにLukSを単独で作用させると、24%がラフト上に存在し、2成分を作用させた場合には膜に結合した毒素成分の90%がリング状複合体としてラフトに存在した。一方LukFは単独ではラフトには存在しなかった。10mMメチルβサイクロデキストリン処理によりLukのラフトへの集合が阻害され、崩壊活性は示さなかった。これらの結果からLukの2成分がヒト多型核白血球膜上の不溶性膜画分(DRM)ラフト上で膜孔オリゴマーを形成することを明らかにした。2. 標的細胞膜ラフト上において膜孔の形成並びに膜孔クラスター化を実証した。すなわちCa^<++>包埋ラフトリポソームとメルカプトエタノール存在下でのみステムを形成するプレステムヘテロ7量変異中間体及びローダミン(Rod2)と反応させ、蛍光顕微鏡下でプレステムの本中間体Capドメインからの切り離しタイミングの可視化に成功した。さらに本リポソーム上における膜孔のクラスター化を「一分子測定技術」で可視化に成功した。3. 膜結合型プロテインキナーゼの発見、及びリン酸化シグナル伝達系の解析: 界面活性剤NP-40で可溶化した白血球膜からラフトリポソームを調製し、本リポソームにLukS、LukF、ATPを添加した結果、LukS上におけるリン酸化反応が起きることを明らかにした。

1. The insoluble membrane fraction (DRM) of the polytypic leukocytes membrane is formed by the two components of the yellow leukocytes membrane (Luk) and Luk F. HPMNL LukS alone is present in 24% of cases, and the two components are present in 90% of cases. A party LukF alone is not a party. 10mM As a result of this, the two components of DRM on the polytype nuclear leukocyte membrane were formed. 2. The formation of membrane pores on the target cell membrane and the realization of membrane pore formation In the presence of Ca^++>, the formation of the intermediate system by embedding the intermediate system and the intermediate system (Rod2) was successfully visualized under microscope. This is a successful visualization of the "molecular assay technology" of the membrane pore. 3. The analysis of membrane binding system: surfactant NP-40 solubilizes leukocyte membrane, and LukS, LukF and ATP are added to the system.