权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

酵母細胞における低分子量G蛋白質の時間、空間的制御機構の解明

阐明酵母细胞中低分子量G蛋白的时空控制机制

基本信息

批准号：
18057025
负责人：
黒川量雄
金额：
$ 3.97万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18057025/
关键词：
小胞輪送 FRET Ypt GTPaseフアミリー小胞輸送 Yptファミリー Arfファミリー

项目摘要

分子スイッチであるG蛋白質が細胞機能発現に特異性と多様性をもたらす機構を解明するには、スイッチのオン、オフが細胞内の「いつ、どこで」起きるかを明らかにすることが必要である。本研究では、生細胞内蛋白質の活性変化に伴う構造変化や蛋白質間相互作用の解析に有効な研究手法であるFRET(Fluorescence Resonance Energy Transfer)の原理を利用して、酵母の蛋白質輸送経路で働く低分子量G蛋白質の時間・空間的相互作用を可視化することを目的としている。本年度は、2分子FRETの系を用いてYptファミリーの一員であるYpt31pとその標的分子であるSec2pとの相互作用を詳細に解析し、さらに酵母変異体を用いてこれらの相互作用がどのように他のYpt(Sec4p)活性化を空間的に制御しているかを調べた。Ypt31pとSec2pにそれぞれYFPとCFPを融合させ、これらの細胞周期の進行に伴った相互作用を可視化した。monomericVenus-Ypt31pとmonomericCFP-Sec2pは芽の先端の及び娘細胞内で共局在するが、FRETシグナルは芽の先端でのみ強く観察された。分裂時には分裂隔壁でFRETシグナルが観察された。この結果から、芽の先端及び分裂隔壁でのみYpt31pとSec2pが相互作用することが明らかになった。つぎに制限温度下でYpt31p/32pの機能阻害が起きる株を用いて、Ypt31p/32pのSec2p、Sec4pの細胞内局在への働きを調べた結果、Ypt31p/32pの機能を阻害するとSec2pとSec4pの芽先端の集積が阻害された。このとき、Sec4pの娘細胞への輸送自体は阻害されなかったことからYpt31p/32pが芽の先端でSec4pの局在化に関与することを明らかにした。

G protein is essential for the development of cellular function, specificity, diversity, and organization. The purpose of this study is to use the principle of FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) to visualize the time-space interaction of low molecular weight G proteins in yeast protein transport pathway. This year, the interaction between two molecules of FRET and one member of Ypt (Sec 4p) was analyzed in detail, and the interaction between two yeasts and one member of Ypt (Sec 4p) was adjusted. Ypt 31p and Sec 2p are used to visualize the interactions between YFP and CFP. monomericVenus-Ypt 31 p, monomericCFP-Sec 2 p, the tip of the bud, and the tip of the bud. When splitting, it is necessary to split the partition wall. The result is that the tip of the bud and the partition wall are Ypt 31 p and Sec 2 p, which interact with each other. The functional resistance of Ypt 31p/32p at limiting temperatures was found to be due to the presence of plant inhibitors, the presence of Ypt 31p/32p and Sec 2p, and Sec 4p in the cellular environment. This is the first time that the Sec4p has been transferred to a cell.