Rhoファミリ-GTP結合蛋白質の活性変化を生細胞で可視化する

活细胞中 Rho 家族-GTP 结合蛋白活性变化的可视化

• 批准号: 14780522
• 负责人: 黒川 量雄
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780522/
• 关键词: RhoA; FRET; Rac1; Cdc42

研究代表者らは、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を利用したRhoファミリーG蚕白質モニター分子(Raichu-RhoA,Raichu-Rac,Raichu-Cdc42)を用いて、昨年度、細胞が運動する際にRac1、Cdc42が細胞進行方向で優位に活性化していることを明らかにした。本年度は(1)増殖因子によるRac、Cdc42活性化の経時変化及びその局在と(2)細胞分裂におけるRho、Rac、Cdc42の活性変化について報告した。(1)増殖因子EGFは細胞のアクチン細胞骨格系の再編成を誘導し、ラメリポディアの形成とメンブレンラフリングを誘導する。EGF刺激によって、Rac1はラメリポディアを形成する直前に細胞全体で均一に活性化し、その後、メンブレンラフリングが続いているにもかかわらず、活性が速やかに減少すること、及びCdc42は、Rac1と同様に速やかに活性化されるが、その活性はRac1と異なり細胞辺縁部のメンブレンラフリングの部位でより高いことが明らかになった。さらにCdc42特異的な不活性化因子CdGAP、Cdc42の経路を阻害できるN-Wasp CRIBドメインを用いることによりCdc42の活性化がEGF依存的なラメリポディアの伸展及びラフリングに必要であることを明らかにした。(2)細胞質分裂時において、RhoA、Rac1、Cdc42活性は、M期の開始とともに速やかに低下することが判明した。その後、収縮環の形成にともなってRhoA活性が上昇し始めるが、一方、Rac1、Cdc42の活性は、細胞質分裂が終了するまで減少し続け、分裂完了後、娘細胞が伸展するとともに上昇することを明らかにした。

The researchers used Rho, Rho, Rac, Rho, Rho, Rho. This year, we report on (1) the temporal changes and changes in the activity of Rac and Cdc42 in proliferation factors and (2) the changes in the activity of Rho, Rac and Cdc42 during cell division. (1)Growth factor EGF induces the reorganization of the skeletal system of cells, and induces the formation and transformation of the cellular structure. EGF stimulation, Rac1, Rac1, Rac1 Cdc42-specific inactivation factors CdGAP, Cdc42 pathway inhibition, N-Wasp CRIB pathway inhibition, EGF-dependent pathway inhibition and pathway inhibition, Cdc42 pathway inhibition, EGF-dependent pathway inhibition and pathway inhibition, Cdc42 pathway inhibition, EGF-dependent pathway inhibition and pathway inhibition. (2)Cytokinesis, RhoA, Rac1, Cdc42 activity, M phase start, speed, and decrease were identified. RhoA activity increased after the formation of the contraction ring, and the activity of Rac1 and Cdc42 decreased after the completion of cytoplasmic division.

项目成果

Kurokawa K, Itoh RE, Yoshizaki H, Ohba Y, Nakamura T, Matsuda M.: "Co-activation of Rac1 and Cdc42 at Lamellipodia and Membrane Ruffles Induced by Epidermal Growth Factor."Mol Biol Cell.. In press. (2004)

Kurokawa K、Itoh RE、Yoshizaki H、Ohba Y、Nakamura T、Matsuda M.：“表皮生长因子诱导的片状伪足和膜皱褶处 Rac1 和 Cdc42 的共激活。”Mol Biol Cell.. 正在出版。

Itoh RE, Kurokawa K, Ohba Y, Yoshizaki H, Mochizuki N, Matsuda M.: "Activation of rac and cdc42 video imaged by fluorescent resonance energy transfer-based single-molecule probes in the membrane of living cells"Mol Cell Biol.. 22(18). 6582-6591 (2002)

Itoh RE、Kurokawa K、Ohba Y、Yoshizaki H、Mochizuki N、Matsuda M.：“活细胞膜中基于荧光共振能量转移的单分子探针对 rac 和 cdc42 视频的激活”Mol Cell Biol..

Yoshizaki, H., Y.Ohba, K.Kurokawa, R.E.Itoh, T.Nakamura, N.Mochizuki, K.Nagashima, M.Matsuda: "Activity of Rho-family GTPases during cell division as visualized with FRET-based probes."J.Cell Biol.. 162. 223-232 (2003)

Yoshizaki, H., Y.Ohba, K.Kurokawa, R.E.Itoh, T.Nakamura, N.Mochizuki, K.Nagashima, M.Matsuda：“通过基于 FRET 的探针观察细胞分裂过程中 Rho 家族 GTP 酶的活性。