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メダカ近縁種ゲノム基盤の整備とそれを用いた新規遺伝子機能獲得機構の解明

青鳉近缘种基因组基础的制备及利用其获取新基因功能的机制的阐明

基本信息

批准号：
20017026
负责人：
成瀬清
金额：
$ 5.38万
依托单位：
National Institute for Basic Biology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

インドメダカ性決定遺伝子の同定X染色体とY染色体を区別して作成した2種類のBACライブラリーとFosmidライブラリーをもちいてXおよびY染色体それぞれについて性決定領域を完全にカバーする物理地図を作成し、インドメダカ性決定領域の塩基配列を完全に決定することができた。インドメダカY染色体の性決定領域にはX染色体にはない特異的領域が存在することが明らかとなった。しかしその領域には逆転写酵素の一部と見られる塩基配列が反復配列として多く含まれるのみでインドメダカ性決定遺伝子の候補となるような配列を塩基配列のみから絞り込むことはできなかった。そこで現在は性決定領域に由来するBAC/FosmidクローンをXX個体に遺伝子導入することで雄への性転換能を有するクローンの同定を行っている。ハブスメダカ性染色体のFISHによる同定:ハブスメダカfosmidライブラリーから性連鎖マーカーがのっているクローンをコロニーハイブリダイゼーション法により単離し、染色体FISH法によってハブスメダカ性染色体を同定した。ハブスメダカZZ個体からの培養細胞系の樹立とBACライブラリーの作成:遺伝子タイピングによって同定したハブスメダカZZ個体(雄)より培養細胞系の樹立をおこなった。L-15培地+15%FBSをもちいて1個体より初代培養細胞を作成し、それを継代することで培養細胞系を樹立することができたことから国立遺伝学研究所比較ゲノム解析研究室(支援班)に持参し、アガロースプラグの作成をおこなった。現在はBACライブラリーの作成をおこなっている。セレベスメダカ及びジャワメダカZZ個体からの培養細胞系の樹立とBACライブラリーの作成セレベスメダカ及びジャワメダカZZ個体よりそれぞれ初代培養細胞を樹立した後、培養細胞を国立遺伝学研究所比較ゲノム解析研究室に持参し、アガロースプラグの作成をおこない、BACライブラリーを作成した。完成したBACライブラリーをもちいて3DPCRによるスクリーニングシステムを完成した。

The two types of BAC and Fosmid chromosomes are distinguished from each other by the identity of the X and Y chromosomes of the sex-determining genes. The X and Y chromosomes are separated from each other by the identity of the sex-determining genes. The sex-determining regions are completely defined by the physical location of the genes. The sex-determining domain of the Y chromosome and the specific domain of the X chromosome exist. A part of the reverse transcription enzyme in the domain is shown in the following table: 1. the base alignment is repeatedly aligned, 2. the base alignment is repeatedly aligned, 3. the base alignment is repeatedly aligned, 4. the base alignment is repeatedly aligned, and 4. the base alignment is repeatedly aligned. The BAC/Fosmid gene is introduced into the individual gene, and the male gene is transformed into the male gene. FISH identification of sex chromosomes: sex linkage, chromosome FISH identification Establishment of cultured cell lines from individuals and BAC generation: establishment of cultured cell lines from individuals (males) L-15 culture +15% FBS culture medium 1 individual culture medium 1 cell culture medium 1 cell culture medium 1 Now BAC is working on a new project. Establishment of cultured cell lines in vitro culture and preparation of BAC profiles in vitro culture were carried out by the Comparative Analysis Laboratory of the National Institute of Genetics. 3DPCR is complete.