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ゲノムDNA単分子解析と細胞サイズコアセルベート内での生化学反応制御・計測

细胞大小凝聚层内的基因组 DNA 单分子分析和生化反应控制/测量

基本信息

批准号：
20034008
负责人：
小穴英廣
金额：
$ 1.79万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題においては、顕微鏡下で狙った1個の細胞から断片化させることなく取りしたゲノムDNAにしてテイルマッピングを行い、探索したい塩基配列の有無、存在する場合はどの位置にあるかを迅速に明らかにするという解析手法の確立を目指している。具体的には、超好熱始原菌をもちいて本手法の有用性を示すと共に超好熱始原菌研究に有用な情報を提供することを目指して研究を進めた。本年産は、「超好熱始原菌KOD1に対するDNA複製開始領域の細胞内配位解析」に焦点を絞り、1)DNA複製開始点に結合するタンパク(Cdc6)の蛍光ラベル手法確立と2)膜付着部位配列の同定に取り組んだ。DNA複製開始点に結合するタンパク(Cdc6)の蛍光ラベル手法確立については、Cdc6抗体を蛍光標識したものをプローブとして用い、蛍光顕微鏡により、1本のゲノムDNA上のどの位置にCdc6タンパクが結合しているかを単分子解析により明らかにする実験をおこなった。その結果、バースとした細胞の細胞膜付近と漏出したゲノムDNAが結合している部分付近で、抗体にラベルした蛍光を観測した。また、このゲノムDNA分子を微小構造体によって個別操作し、マッピングの分解能を改善することも試みた。その結果、顕微鏡視野内に浮遊するゲノムDNAを、微小構造体によって捕捉し、光ピンセットで操作可能なことの実証に成功した。膜付着部位配列の同定については、上述の実験結果より、バースト細胞の細胞膜部分に付着しているのは、複製開始領域であることが強く示唆された。コントロール実験も、この結果を支持するものであった。

This research topic is to explore the presence or absence of DNA base alignment under microscopes, and to establish analytical methods for the location of DNA base alignment. Specific heat source bacteria, heat source bacteria, heat This year, we focused on the following topics: 1) Establishment of the method for determining the binding site of DNA replication initiation site (Cdc6); 2) Identification of the alignment of membrane attachment sites. DNA replication start point binding Cdc6 and fluorescence detection method established Cdc6 antibody fluorescence identification and use, fluorescence microscopy, 1 this must be DNA binding site Cdc6 fluorescence detection and molecular analysis. As a result, the cell membrane of the cell is close to the leakage of DNA, and the antibody is close to the detection of light. The DNA molecules are individually manipulated and decomposed. As a result, the DNA and micro-structures in the field of micro-microscopy were successfully captured and manipulated. The membrane attachment sites are arranged in the same way as described above, and the cell membrane of the cell is attached to the site, and the replication starts in the site. The results of the survey are as follows: