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単一標的細胞での遺伝子発現抑制誘導系の開発

单靶细胞基因表达抑制诱导系统的开发

基本信息

批准号：
20034026
负责人：
高木新
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、モデル動物である線虫C.elegans個体において単一標的細胞で目的の遺伝子発現を抑制できる実験系を確立することである。発生過程を通じて異なる細胞・場面で繰り返し使用される遺伝子の多くは、その変異体が致死となる。これらの遺伝子が発生過程の各場面で特定の細胞でどのような機能を果たしているのかを解明するには、個体内の該当する細胞に限定してその遺伝子の機能を抑制する必要がある。私達は、すでに赤外レーザ顕微鏡による単一細胞加熱と熱ショックプロモーターを組み合わせたC.elegansの単一標的細胞における遺伝子発現誘導系(IR-LEGO)を確立している。本年度は、昨年度開発したCre/loxPと、構成的発現を誘導するelf-3遺伝子のプロモーターを組み合わせた誘導可能な持続的遺伝子発現系を利用して、RNA干渉(RNAi)必須因子rde-1cDNAをrde-1変異体中の単一細胞で発現させ、単一細胞でRNAi能を救済することを試みた。線虫のHox遺伝子であるmab-5遺伝子は表皮細胞の運命決定を司ることが知られている。mab-5遺伝子のfeeding法によるRNAiを施した幼虫の雄の尾部に存在し、将来感覚器rayを形成する単一表皮細胞V5,V6でrde-1cDNAを発現させたところ、その細胞の子孫における分裂パタンがmab-5変異体と同様の表現型を示し、細胞系譜が異常となることが確認された。この結果から、本手法による単一細胞での遺伝子発現抑制が可能であることが実証された。

はの purpose, this study モデル animal である worm c. elegans individual において単 traces of a target cell で purpose の伝 son 発 now を inhibit できる be を験 department establish することである. 発 birth process を tong じて different なる cells, scene で Qiao り return し use される heritage 伝 son のく more は, その - variant が death となる. これらの posthumous son 伝が発 operations process の scene で specific の cells でどのような function を fruit たしているのかを interpret するには, individual の should する cells に qualified してその posthumous son 伝の function を inhibit する necessary がある. Private は, すでに red outside レーザ顕 micromirror による単 a cell heating と hot ショックプロモーターを group み close わせた c. elegans の単 a target cell における heritage 伝 son 発 induction system (IR - LEGO) now を establish している. は this year and last year 発した Cre/loxP と, composition of 発 now を induced する elf - 3 heritage 伝 son のプロモーターを group み close わせた induced may feel 続な posthumous son 伝発 department を now use して, RNA dry involved (RNAi) must be factor rde - 1 cdna を rde - 1 - variants in の単 a cell で発 now させ, 単 One cell でRNAi can を rescue するとをとを try みた. The fate of the epidermal cells of the nematode Hox remains 伝 offspring である and mab-5 remains 伝 determines the を, る, とが, られて and る. Mab - 5 heritage 伝 son の bean method による RNAi を shi した larvae の male の tail にし, future device ray 覚を form する単 epidermal cells V5, V6 で rde - 1 cdna を発 now させたところ, その cells の sons における split パタンが mab 1-5 - と with others の phenotype をし, Cellular pedigree が abnormality となるとがとが confirmation された. The <s:1> 伝 result of らら and the inhibition of 伝 in the で remains of one cell by this technique による単 may be possible であるとがとが evidence された.