神経認識分子A5と相互作用する因子の検出

检测与神经识别分子A5相互作用的因子

• 批准号: 03833016
• 负责人: 高木 新
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03833016/
• 关键词: 神経回路網形成; 細胞膜蛋白質; ニワトリ; A5分子

神経認識分子A5と相互作用する因子を検出する第一ステップとして,本年度は以下の実験を行った.1.ニワトリA5分子のcDNAクロ-ニングアフリカツメガエルA5分子のcDNAをプロ-ブとしてラムダgt11,ZAPニワトリ胚脳cDNAライブラリ-をスクリ-ニングしてニワトリA5分子のcDNA全長をクロ-ニングした.全塩基配列を決定し,ニワトリA5分子はアフリカツメガエルA5分子と全長にわたって高い相同性を示すことを明らかにした.また,in situ hybridizationを行い,mRNAが視蓋,海馬等に局在している事を明らかにした.2.ニワトリA5分子に対する抗体の作成.原核生物の発現ベクタ-(Studierらによって開発された大腸菌ーpETの系)を用いて,ニワトリcDNAからニワトリA5分子断片の合成を試みた.三種類の蛋白断片を合成したが,このうち二種類については可溶化できず,抗体産生もみられなかった.残り一種類について抗体作成に成功した.これを抗原としてモルモット,マウスから抗血清を作成した.この抗血清はニワトリ胚脳組織切片に結合し,結合パタンはニワトリA5分子mRNAの分布と一致していた.また,この抗血清はニワトリcDNAをトランスフェクションしたCOS細胞にも結合した.当初は,膜貫通部分を欠損させたニワトリA5分子をCOS細胞にトランスフェクションして分泌型A5分子を合成させて,これを抗原として用いる予定であったが,精製が難しく断念した.

1. The cDNA of A5 molecule was identified as the first step in the identification of interacting factors, and the following developments were carried out in the current year. 1. The cDNA of A5 molecule was identified as the full-length cDNA of A5 molecule. All base alignment is determined, and the A5 molecule is identified. 2. Production of antibodies against A5 molecules. Prokaryote development strategy-(Studier developed E. coli pET system) was used in the synthesis of A5 molecular fragments. Three kinds of protein fragments are synthesized, two kinds of protein fragments are solubilized, and antibodies are produced. A kind of antibody was successfully created. Antigen and antiserum The antiserum binds to the A5 mRNA in embryonic tissue sections. The anti-HCV cDNA was synthesized from COS cells. At the beginning, the membrane penetration part was damaged, and the secretory A5 molecule was synthesized in COS cells.