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電子顕微鏡イメージング法によるイネ萎縮ウイルスの吸着、複製、輸送時の構造解析

利用电子显微镜成像对水稻萎缩病毒吸附、复制和运输进行结构分析

基本信息

批准号：
20051012
负责人：
岩崎憲治
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20051012/
关键词：
イネ萎縮ウイルス電子線トモグラフィー電子顕微鏡

项目摘要

アァイトレオウイルスの生活環を構成する主要なステッフにおいて、昆虫細胞内でウイルスが構築する超分子構造の解明を目指し、本特定領域研究計画研究班員である大村敏博博士との共同研究のもと、3D電子顕微鏡イメージング法をウイルス感染細胞に適用した。本年度は、当初の計画にもあったRDVと同属のレオウイルス科Rice Gall Dwarf Virus (RGDV)について、その感染細胞内に共焦点顕微鏡や通常の透過型電子顕微鏡観察において興味深い超分子構造の存在が認められたため、3D電子顕微鏡イメージングによる解析を行った。RGDVを感染させた媒介昆虫細胞において、ウイルス複製部位であるバイロプラズムでは、ウイルスのコアタンパク質P5だけでなく、非構造ウイルスタンパク質であるPns7とPns12を含んでいることが、大村ら農研センターグループの研究でわかった。実際、微小管の脱重合剤の添加は、ウイルスと微小管との会合抑制し、ウイルスの複製に著しい影響を与えることなく、細胞からのウイルス放出を阻害した。RGDV感染媒介昆虫細胞のプラスチック切片の電子線トモグラフィーを行ったところ、微小管に沿って規則正しく並んでいるRGDVが認められた。本解析を行う上で、撮影時のデフォーカス量の検討を行ったところ、チューブリンに相当する球状体が認められるほど分解能を向上させることができた。また、トモグラムのスライス像は、微小管とウイルスとの間になんらかの分子が存在することを示唆するものであったが、同定までは当該年度にはできなかった。RGDVが感染細胞において観察されるミトコンドリア周辺へのウイルス粒子の特異的な集合状態を電子線トモグラフィーで三次元可視化したところ、ウイルス粒子とミトコンドリアの間には、隙間があり、直接結合しているのではないことが明らかになった。

The main elements of the life cycle of insects are: the understanding of supramolecular structures in insect cells; the joint research of Dr. Toshihiro Omura, a researcher in this specific field; and the application of 3D electron microscopy to infected cells. This year, the original project of RDV and the genus Rice Gall Dwarf Virus (RGDV) was carried out to detect and analyze the presence of supramolecular structures in infected cells by confocal microscopy and general transmission electron microscopy. RGDV infection vector insect cells in the middle, its replication site, its structure, its quality P5, its structure, its quality P7, P12, including the middle, Omura agricultural research center. In fact, the addition of micro-tube de-coincidence agent, micro-tube convergence inhibition, micro-tube replication, and micro-tube emission inhibition RGDV infection vector insect cells and electronic lines cut into sections, microtubes along the rules of positive and negative RGDV recognition This analysis is based on the analysis of spherical particles and their decomposition energy. In the same year, the number of molecules that exist in the same way as the number of molecules that exist in the same way. RGDV infects cells, detects and detects the presence of particles, and binds directly to particles.