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転写制御におけるストレスとヒストンのメチル化

转录调控中的应激和组蛋白甲基化

基本信息

批准号：
20052029
负责人：
前川利男
金额：
$ 3.97万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで我々はATF-2遺伝子ファミリーメンバーのノックアウトマウスを作製して生理学的な機能をマウス個体を用いて解析してきた。ATF-7遺伝子欠損マウスは音響驚愕実験とPPI及びビー玉隠し実験で異常を示し、セロトニンに関係する行動異常が見られた。DNAマイクロアレーを用いた解析で、この時HTR5Bの発現が中脳の背側縫線核で大幅に亢進していることが明らかに成った。この事から、ATF-7は他のファミリーメンバーのATF-2やCRE-BPaとは異なり、本来転写を負に制御している可能性が浮かび上がって来た。今回、HeLa細胞を用いてFLAG-HAタグの付いたATF-7を発現する細胞株を作製し、大量培養後、核抽出液から抗FLAGと抗HA抗体を用いて、複合体を精製した。構成因子を質量分析によって同定した結果、DNA-PKを含むヘテロクロマチンを構成する因子やヒストンシャペロン等、これまでATF-2遺伝子ファミリーメンバーとの関与が全く知られていない多くの因子が同定された。次に、ラット中脳の縫線核由来の神経細胞RN46Aの細胞抽出液をATF-7特異抗体で免疫沈降すると、ヒストンH3K9のトリメチル化酵素であるESETが供沈されてくる事が明らかに成った。また、ATF-7遺伝子欠損マウスではHTR5B転写調節領域のヒストンH3K9のトリメチル化が野生型と比較して有意に低下していた。以上の結果から、ATF-7は核内で仲介因子mAMを介してH3K9のトリメチル化酵素であるESETをリクルートしてくる事によって、HTR5Bの遺伝子発現を抑制していると考えられる。今回、新たに見つけたヘテロクロマチンの維持・形成に関与する因子はヒストンのメチル化に関与して、ATF-7の標的遺伝子の転写抑制に関与していると推定している。また、ストレス刺激によってATF-7複合体が一旦解離する事も見出した。

We should use the ATF-2 software to analyze the mechanism of physiology and analyze it in the laboratory. There is no need for ATF-7 to hear the sound, sound The DNA system has been used to analyze the information, and the HTR5B has been able to detect a significant increase in the number of back-to-back nuclear attacks. If you don't know what to do, ATF-7 will tell you what to do. If you don't know what to do, you will have to write something about the possibility that you may have something to do with it. This time, HeLa cells were incubated with FLAG-HA cells and ATF-7 cells. After a large amount of culture, the nuclear extract was used for anti-FLAG and anti-HA antibodies, and the complex was used. The results of factor analysis and quantitative analysis show that the results are the same as those of the results, and that of DNA-PK is different from that of other factors, such as the number of factors, the number of factors, and so on. In the second and third place of the disease, the origin of the nucleus of the cell RN46A cell extract, the specific antibody of ATF-7, the antibody of immune sedimentation, the enzyme ESET, the enzyme enzyme, the enzyme. The children of ATF-7 and ATF-7 are not interested in writing the field, the H3K9, the wild type, the wild type, and the intentional low level. The results of the above results show that mAM mediator in the ATF-7 nucleus, H3K9 mediator, enzyme enzyme, ESET mediator, HTR5B mediator, enzyme, enzyme. This time, this time, the new information is different from each other. In this case, it is possible to change the relationship between the two factors, the write suppression of ATF-7, and the presumption of error. Once the ATF-7 complex is dissociated, the event will be out of order.