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細胞増殖関連遺伝子の転写制御蛋白質の機能構造

细胞增殖相关基因转录控制蛋白的功能结构

基本信息

批准号：
02263215
负责人：
前川利男
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02263215/
关键词：
転写因子 DNA結合蛋白質

项目摘要

Myb蛋白質は塩基配列特異的にDNAに結合する転写活性化因子であるが、MybとDNAの相互作用の分子機構は全く不明であった。MybのDNA結合ドメインにはトリプトファン残基が周期的に並んでおり、この特徴はetsがん遺伝子産物にも見られることから、DNA結合に重要な役割を果たしているのではないかと推定されている。そこでmyb蛋白質のDNA結合ドメインに一連の変異を導入し、変異蛋白質のDNA結合能を解析すると共に、mybDNA結合ドメインのみを含む蛋白質を大腸菌で大量発現させ精製し、その構造をマンスペクトルなどの分光学的方法により解析した。その結果、周期的に位置するトリプトファン残基が蛋白質内部で疎水性コアを形成し、全体の構造を保つのに重要な役割を果たしていることを明らかにした。そしてこの“トリプトファンクラスタ-構造"がmybやetsを含む一群のDNA結合蛋白質に共通の特徴であろうと提唱した。また私達はこれまでにNFーκB部位に結合する転写因子HIVーEP1のcDNAをクロ-ニングし、メタルフィンガ-構造を有することを見出した。そこで今年度はT細胞で特に発現の高い関連遺伝子のcDNAクロ-ニングを試み、HIVーEP2、HIVーEP3の2つのcDNAを得た。HIVーEP2は211kDaの蛋白質でそのmRNAはT細胞においてPHA、PMA刺激で著しく上昇することが示され、細胞増殖に重要な役割を果たしていることが示された。HIVーEP1とHIVーEP2の構造を比較するとホモロジ-の高い領域が3ケ所見出された。領域Iは核内移行シグナルとSer/Thrに富む配列を有し、領域IIはメタルフィンガ-構造を持つDNA結合ドメインである。また領域IIIは酸性アミノ酸に富み、転写活性化機能を持つことが示唆された。これらの結果により、NFーκB部位に結合する転写因子の構造と機能を解析するための基礎が確立された。

Myb protein binds to DNA with specific base alignment, and the molecular mechanism of Myb and DNA interaction is completely unknown. Myb DNA binding residues are periodically combined, characterized, and produced by DNA binding important service results. The DNA binding ability of myb protein was analyzed by DNA binding method. The protein was produced in large quantities in E. coli, purified and purified. The structure of myb protein was analyzed by spectroscopic method. As a result, the position of the cycle is different from that of the residue in the protein, and the structure of the protein is important for the formation of the protein. "Myb" contains a group of DNA binding proteins with common characteristics. The expression of the cDNA for the transcription factor HIV EP1 was detected at the NF-κB site. This year, the cDNA of highly related genes specifically developed in T cells was obtained by cDNA sequencing, HIV EP2 and HIV EP3. HIV EP2 is a 211kDa protein and its mRNA rises in response to PHA and PMA stimulation, indicating that it is important for cell proliferation. HIV EP1 and HIV EP2 are structurally comparable. Domain I has a rich DNA sequence, domain II has a rich DNA sequence, and domain I has a rich DNA sequence. Domain III: Acid rich, active, functional. The structure and function of NF-κB binding factor were analyzed and established.