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タンパク質の誕生と折りたたみの1分子解析

蛋白质诞生和折叠的单分子分析

基本信息

批准号：
20059009
负责人：
船津高志
金额：
$ 4.1万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20059009/
关键词：
1分子計測生物物理ナノバイオリボソームシャペロニン

项目摘要

大腸菌のシャペロニンGroELは2つの樽型リングが底同士を向かい合わせにした構造をしており、ATP依存的に補因子のGroESと結合解離を繰り返すことで変性タンパク質の折れたたみを介助する。GroELは2つのリングを交互に利用しながら反応サイクルを進行させており、GroELの両側のリングにGroESが2個同時に結合した状態(football型複合体)は存在しないと考えられていた。しかし、我々が蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を指標としてGroEL-GroES間の結合量を測定したところ、変性タンパク質が十分量存在し定常的に反応が進行する条件下において、football型複合体が形成されることを昨年度、明らかにした。今年度、我々は変性タンパク質非存在下においてGroEL-GroES間相互作用をFRETにより測定した。その結果、ATP存在下(反応サイクル時)におけるFRETシグナルは、GroELとGroESが1:1で結合した複合体(bullet型複合体)を形成する条件であるADP、フッ化ベリリウム(BeFx)共存時に近い値を示した。すなわち、変性タンパク質が存在しないとfootball型複合体の形成率が著しく低下することが分かった。次に、我々は変性タンパク質の濃度を変化させてGroEL-GroES間のFRET効率の変化を調べた。その結果、変性タンパク質の種類によらず、変性タンパク質濃度依存的にFRET効率が増加することが確認された。さらに、このFRET効率の変化は変性タンパク質によるGroELのATPase活性の活性化と良好な相関関係を示すことが分かった。以上の結果から、定常状態の反応サイクルにおいては、変性タンパク質がGroELに相互作用することによりfootball型複合体の形成を促進されることが示唆された。

大隐孢子菌属真菌GroEL-2型隐孢子菌属真菌GroEL-2型隐孢子菌属真菌GroES-2型隐孢子菌属真菌GroES-2型隐孢子菌属真菌GroEL-2型隐孢子菌属真菌GroEL-2 GroEL公司2号合同规定的相互利用的反倾销诉讼程序和执行规则，GroEL公司2号合同规定的反倾销诉讼程序和GroES公司2号合同规定的联合申诉状（足球型实体）并不存在反倾销诉讼规则。荧光标记，我的墙板发光共聚焦荧光位移标记（FRET）指荧光标记法GroEL-GroES荧光结合量定量测定荧光标记法，荧光性荧光标记法百分含量存在定量异常的反荧光标记法进行条件下的荧光标记法，足球型发光体形成的恐龙化石年代，明训生物标记法。今年度，我墙板的抗渗性已经不存在下一个问题了，GroEL-GroES的相互作用FRET测试要求确定。腺苷酸、ATP存在下（反式腺苷酸）的荧光共振能量转移酶（FRET）、GroEL与GroES 1：1复合荧光合成体（子弹型荧光合成体）形成荧光条件的腺苷二磷酸（ADP）、腺苷化磷酸酶（BeFx）共沉淀近距离显示荧光。橄榄球，变性橄榄球，存在着橄榄球式足球综合体形成率明显低于橄榄球式足球的分球。第二次，我的墙板渗透性测试仪测量了GroEL-GroES荧光共振能量转换率和渗透率。可识别的结果、非线性不确定性和非线性不确定性程度依赖于可发现的FRET比率。荧光素酶、荧光FRET活性率降低的荧光素酶抑制剂GroEL ATP酶活性降低的良好相态显示荧光素酶活性降低。以上为足球型实体足球形成的相互促进的足球竞赛，以足球型实体足球为代表的足球竞赛形式。