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繰り返し凍結、解凍が可能なクライオ光学顕微鏡の開発

开发可重复冷冻和解冻的冷冻光学显微镜

基本信息

批准号：
10878114
负责人：
船津高志
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878114/
关键词：
赤外線レーザー蛍光顕微鏡急速凍結ブラウン運動

项目摘要

生体試料を冷却・凍結できる顕微鏡の作製と評価を昨年度に終え、今年度は加熱法の検討を行った。生体試料を局所的に高時間分解能で加熱するためには、赤外線レーザーを用いることが有効である。特に、水分子の吸収波長である1,500nm付近の赤外線レーザーを対物レンズで集光させることにより、生物試料を非侵襲的に加熱することが可能である。そこで、オリンパス光学工業の倒立顕微鏡IX70を改造し、出力2Wの赤外ラマンレーザ(波長1,460nm)を照射するための赤外レーザー顕微鏡システムを組み立てた。実際に、50〜55℃でゾル-ゲル相転移するメチルセルロース水溶液に対物レンズを用いて赤外線を集光させたところ半径〜10μmの局所領域でゲル化が起こった。以上の結果から、局所領域を周囲より40℃以上も加熱できることを確認した。緑色蛍光タンパク質(GFP)を発現している細胞に赤外線レーザーを照射すると温度の上昇にともなってGFPの蛍光強度が減少した。この現象を利用して局所領域の温度を測定できることもわかった。試料の3次元的な温度分布を測定するために既存の共焦点蛍光顕微鏡に赤外線レーザー顕微鏡システムを組み込んだ。これにより、生物試料を冷却、加熱(凍結、解凍)できるシステムが構築できた。

Biological sample cooling, freezing, microscoping, evaluation, last year's end, this year's heating, evaluation A biological sample can be heated at high temperature and can be used in infrared radiation. In particular, the absorption wavelength of water molecules is less than 1,500nm, and the absorption wavelength of water molecules is less than 1,500nm. The absorption wavelength of water molecules is less than 1, 500 nm. The inverted micro-mirror IX70 of the optical industry was modified and the output of the inverted micro-mirror was 2W (wavelength 1,460nm). In practice, 50 ~ 55℃ temperature range: 100 ~ 200 ℃; phase shift: 100 ~ 200 ℃; phase shift: 100 ℃; phase shift: 100 ~ 200 ℃; phase shift: 10 The above results are confirmed by heating above 40℃. Green fluorescence (GFP) is emitted from the cells, and the intensity of GFP fluorescence decreases when the temperature rises. This phenomenon is used to determine the temperature of the field. The three-dimensional temperature distribution of the sample is determined by the existing confocal microscope and infrared microscope. The biological sample is cooled, heated (frozen, thawed) and constructed.