ヒメツリガネゴケを用いた幹細胞制御遺伝子ネットワークの解明

利用苔藓立碗藓阐明干细胞调控基因网络

• 批准号: 20061027
• 负责人: 長谷部 光泰
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: National Institute for Basic Biology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20061027/
• 关键词: ポリコーム遺伝子; オーキシン; class 1 KNOX; ダイレクトターゲット; クロマチン修飾; 幹細胞; CLV3; WOX

(1) 減数分裂によるPpCLF遺伝子の発現誘導機構 : PpCLF遺伝子座にCitine遺伝子をノックインし、PpCLF-Citrine融合タンパク質を作るような形質転換体を作製し融合タンパク質の時空間制御様式を調べたところ、PpCLFの発現制御は減数分裂とは直接関係しないことがわかった。(2) オーキシンによるclass 1 KNOX MKN4遺伝子の制御機構 : オーキシン応答性プロモーターGH3 promoter : : Cerulean-ER移行シグナノルとclass 1 KNOX MKN4-Citrineコンストラクトを作製し、形質転換体を作出した。しかし、前者の発現様式がuidA遺伝子を融合した場合(Fujita, et.al. 2008)と異なり、現在、その理由を検討中である。(3) MKN4のダイレクトターゲットの同定、クロマチン修飾変化の解析 : ChIP-Seq法でMKN4のダイレクトターゲットの同定、MKN4発現前後におけるクロマチン修飾変動を解析するために、MKN4-Citrine形質転換体を作出した。現在、ChIP-seqの条件を検討中である。(4) CLV3、WOXホモログの機能解析15種類のCLV3様人工合成ペプチドを合成し、茎葉体形成に関する影響を調べたが、どれも影響は見られなかった。ただ、切断葉細胞の幹細胞化において1つのペプチドが阻害的効果を示したので、原糸体からの幹細胞形成にも関与する可能性があるので、現在、該当遺伝子の遺伝子破壊体を作製中である。3つのWOX遺伝子のうち、茎葉体形成時に発現している2つの遺伝子それぞれの遺伝子破壊体を作製したが、表現型に影響は見られなかった。現在、二重突然変異体を作製中である。(5) PpPLETHORAのダイレクトターゲットの同定、クロマチン修飾変化の解析ChIP-seq解析用に、HA、MYC、CitrineをPpAPB1, 3, 4にノックインした形質転換体を作製中である。

（1）通过减数分裂诱导PPCLF基因的表达机制：当在PPCLF基因座的酸酸基因中敲击转化因子并产生形成PPCLF-CITRINE融合蛋白的转化因子，并且研究了融合蛋白的时空调节时，发现了PPCLF的表达对照并不直接相关。 （2）生长素1级MKN4基因的调节机制：生长素反应性启动子GH3启动子：Cerulean-ER过渡信号纳米和1类Knox MKN4-Citrine构建体，制备了转化剂。但是，以前的表达模式与UIDA基因融合的情况有所不同（Fujita等，2008），目前正在研究此情况。 （3）鉴定MKN4的直接靶标和染色质修饰的分析变化：使用CHIP-SEQ方法识别MKN4的直接靶标，并分析MKN4表达前后的染色质修饰变化，创建了MKN4-氯氨酸转化体。我们目前正在考虑Chip-Seq的条件。 （4）对CLV3和WOX同源物的功能分析进行了15种类型的CLV3样人工合成肽，并研究了对茎和叶片形成的影响，但没有发现它们受到影响。但是，由于一种肽对切割叶细胞的干细胞形成具有抑制作用，因此它也可能参与原蛋白细胞的干细胞形成，因此我们目前正在为相关基因准备基因破坏。在三个WOX基因中，产生了在茎形成和血液菌形成过程中表达的两个基因中的每个基因的基因破坏，但未观察到表型。目前正在生产双重突变体。 （5）鉴定ppplethora的直接靶标和染色质修饰的变化进行芯片ze分析，目前正在通过将HA，MYC和CITRINE撞入PPAPB1、3和4中来制备转化体。

项目成果

Physcomitrella patens AINTEGUMENTA / PLETHORA / BABYBOOM orthologs are involved in stem cell characterization

小立碗藓 AINTEGUMENTA / PLETHORA / BABYBOOM 直向同源物参与干细胞表征

• 发表时间: 2008
• 作者: Aoyama;et.al.
• 通讯作者: et.al.

植物の世代交代の分子機構とボディープランの進化

植物世代交替和身体结构进化的分子机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 北川佳奈子;他6名;杉本 慶子;Masatoshi Yamaguchi;Kohsuke Hashimoto;山口 雅利;Msatoshi Yamaguchi;Masatoshi Yamaguchi;山口 雅利;長谷部光泰
• 通讯作者: 長谷部光泰

The origin and evolution of shoot system in land plants

陆地植物茎系统的起源和进化

• 发表时间: 2008
• 作者: 北川佳奈子;他6名;杉本 慶子;Masatoshi Yamaguchi;Kohsuke Hashimoto;山口 雅利;Msatoshi Yamaguchi;Masatoshi Yamaguchi;山口 雅利;長谷部光泰;Mitsuyasu Hasebe
• 通讯作者: Mitsuyasu Hasebe