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オリゴペプチドを固定した生体接着材料の設計と構造・機能の相関性

固定化寡肽生物粘附材料的设计及其结构与功能的相关性

基本信息

批准号：
63604026
负责人：
中島章夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63604026/
关键词：
オリゴペプチド細胞接着性蛋白質吸着 RGDS Lー細胞ペプチド合成

项目摘要

本研究の目的は細胞接着性が期待されるオリゴペプチドArg-Gly-AspーX(X:Ser,Val,Alaなど)を高分子材料に固定化し、材料表面の構造を解析するとともに材料表面と細胞との相互作用をin vivo,in vitroで解明することにあり、得られた成果は次の通りである。(1)オリゴペプチドの合成と固定化:X=Serの場合について、固相法ならびに液相法により合成を行った。前者では改良メリフィールド法を用い、反応の迅速化のため超音波を利用し優れた成果をあげた。後者に関しては合成のプロセスについて詳細な検討が加えられ、Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)およびスペーサーとしてGlyの三量体をつけたG-G-G-RGDSを収率よく合成する方法を確立し、大量の試料を調製した。得られたオリゴペプチドRGDSおよびG_3-RGDSはカルボジイミド法、あるいはpートルエンスルホニルクロリドを用いて、ポリビニルアルコール(PVA)、エチレンービニルアルコール共重合体(EVA)、エチレンーアクリル酸共重合体(EAA)など高分子材料表面に固定化した。(2)固定化材料の表面構造解析と蛋白質吸着:ESCA測定から材料表面での元素比O/C、N/Cを求め固定化を確認するとともに、PVA、PVA-RGDS、EAA、EAA-RGDS、EAA-G_3RGDSについて臨界表面張力を求め、オリゴペプチドを固定化することによって表面の親水性が増加することが明らかになった。さらに、これら固定化表面への蛋白質BSA、IgGの吸着挙動を詳細に検討した。(3)固定化材料への細胞付着:PVAにHMDIで固定化した材料PVA-(CH_2)_<6ー>RGDSについて、マウス上皮由来繊維芽細胞(Lー細胞)の時間に対する付着実験を血清の不在下、存在下で観測し、5野間後の付着数が不在下で対比物の約10倍、存在下で約30倍になることを見出し、さらに画像処理装置により付着細胞形態の時間的変化についても検討した。

The purpose of this study is to investigate the cell adhesion between Arg-Gly-Asp X(X:Ser,Val,Ala) and the surface structure of polymer materials. (1)The synthesis and immobilization:X=Ser, solid phase and liquid phase The former is an improvement in the use of ultrasound, and the latter is an improvement in the use of ultrasound. The latter is related to the synthesis of G-G-G-RGDS and the preparation of a large number of samples. In this paper, the author studies the immobilization of RGDS on the surface of polymer materials, such as PVA, EVA, EAA, etc. (2)Analysis of surface structure and protein adsorption of immobilized materials:ESCA determination of O/C and N/C ratios on the surface of materials, confirmation of immobilization, PVA, PVA-RGDS, EAA, EAA-RGDS, EAA-G_3RGDS, determination of critical surface tension, determination of surface hydrophilicity, and determination of surface hydrophilicity. The adsorption of BSA and IgG on the immobilized surface was studied in detail. (3)Immobilization material PVA-(CH_2)_<6->RGDS Immobilization material PVA-(CH