ヒトリンホトキシンに対する細胞膜レセプターの構造

人淋巴毒素细胞膜受体的结构

• 批准号: 63614510
• 负责人: 大沢 利昭
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63614510/
• 关键词: リンホトキシン; リンホトキシンレセプター

1.LTレセプターの誘導:ヒトU937細胞をIFNγ処理するとLTに対する細胞障害活性が100倍上昇した。この際のLTレセプターの変化について^<125>I-LTの結合実験、架橋実験を行なったところ、レセプター数が約50%上昇したのみで結合定数の変化や新らたなレセプターの出現は認められなかった。2.LTの取り込みと分解:LTに対する反応性の異なるL.P3細胞、U937細胞についてLTの細胞内への取り込みおよび、その分解反応について比較を行なった。LTの細胞内への取り込みは30分で最大となり、2時間で取り込まれた大部分のLTが分解され細胞外へ放出された。しかし両細胞において相違は認められず反応性の違いは説明できなかった。3.LTレセプターの精製:U937細胞を大量に培養しLTレセプターの精製を行なった。LTをウサギに免疫し抗LT抗体を作製しさらに抗LT抗体カラムを調整した。一方、大量に培養したU937細胞10^<10>個にLTを結合させDSSにより架橋を行なった。これから膜画分を調整しTX-100出可溶化後抗LT抗体カラムにのせカラムに吸着したLT-LTレセプター複合体を得た。得られたLTレセプター複合体はSDS-PAGEで80Kであった。また、LTを固定化したLT-Affi-Gclカラムを作製しレセプターの精製を行なった。U937の膜画分をTX-100で可溶化しLTカラムにのせ十分洗浄後、グリシン塩酸によりカラムに吸着したレセプターを溶出した。溶出した画分をSDS-PAGEで解析したところ60Kと65Kの2つのレセプターのバンドが観察された。架橋剤の実験では一つのLT-LTレセプターの複合体(80K)しか観察されなかったこと、また種々の解析においてレセプターと感受性には相関が認めらなかったことから、LTレセプターはLT結合能を持つ60Kのタンパクとそれに相互作用をLLTに対する感受性を規定している新らたなタンパク65Kから成ることが示唆された。

1. Induction of LT inhibition: U937 cells were treated with IFNγ and LT inhibition activity increased 100 fold. In this case, the combination of LT and LT, the bridging of LT and LT, the increase of LT and LT, <125>the 2. LT's selection and decomposition:LT's selection and decomposition are different in L.P3 cells and U937 cells. The intracellular concentration of LT is 30 minutes, the maximum concentration is 2 minutes, and most of LT is released outside the cell. The cell is in violation of the law. The cell is in violation of the law. 3. LT Refinement:U937 cells were cultured in large quantities and LT Refinement was carried out. LT is immune and anti-LT antibodies are regulated. One side, a large number of U937 cells cultured 10 <10>^LT, DSS, bridging The membrane composition was adjusted to TX-100 and the LT-LT complex was obtained after solubilization. SDS-PAGE of the complex was performed at 80K. LT-Affi-Gcl-A-R-A U937 film separation TX-100 is soluble, soluble. SDS-PAGE was used to analyze the dissolution at 60K and 65K. The bridge structure of the LT-LT complex (80K) was observed and analyzed. The sensitivity of the LT-LT complex was correlated with the binding energy of the LT-LT complex (80K). The sensitivity of the LT-LT complex (80 K) was determined by the interaction between the LT-LT complex and the LT-LT complex.

项目成果

K.Hirano: J.Biochem. 105. 120-126 (1989)

K.Hirano：J.Biochem。