大腸菌染色体複製における忠実度制御の分子機構の研究
大肠杆菌染色体复制保真度控制的分子机制研究
基本信息
- 批准号:63615518
- 负责人:
- 金额:$ 1.6万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1988
- 资助国家:日本
- 起止时间:1988 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.DNA合成酵素をコードする遺伝子のミューテーター変異株の解析:大腸菌DNAポリメラーゼIIIホロ酵素の10種のサブユニットのうちαサブユニットはポリメラーゼ活性を、εサブユニットは校正機能に必要な3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を担っていることが知られている。今回、αサブユニットをコードするdnaE遺伝子の条件致死性ミューテーター変異株を分離した。この変異株から精製したDNAポリメラーゼIIIには野生型の場合と同様に等量のαとεサブユニットが含まれていたが、その校正機能は野生型のそれに対し1/10以下に低下していることが明らかになった。このことから、DNAポリメラーゼIIIの校正機能は単にεサブユニットの3'→5'エキソヌクレアーゼだけの働きではなく、αサブユニットの未知の作用が関与していることが強く示唆された。2.試験管内DNA合成系における塩基対形成の誤りとその校正:鋳型としてホモポリマーDNAを用い、それとはワトソン-クリック型の塩基対を形成しないdNTPを基質としてDNA合成を行い、その誤った取り込みをシーケンスゲルで解析する方法を確立した。校正機構を持たないαサブユニットはA-Aペアの形成は許さないがA-GとA-Cの誤った塩基対はある程度形成することが明らかになった。一方、校正機能を持つDNAポリメラーゼIIIはA-Cペアを取り除くことができるが、A-Gペアに対しては働かないことが明らかになった。3.忠実度制御におけるmutT遺伝子産物の機能の酸素学的解析:高純度に精製したMutTタンパク質に上記のA-Gペアの形成を制御する活性を見いだした。このタンパク質はdGTPaseの活性も有していた。A-Gペアの形成には基質のdGTPがsyn型になることが必要であると予想されるので、MutTタンパク質はsyn型だけを特異的に分解することによりdGTPのantisyn変換の比率を小さくしている可能性が示唆された。
1. DNA synthesis enzyme analysis of different strains: Escherichia coli DNA sequencing III enzyme 10 kinds of enzymes in the range of 3'to 5' to 6 'to 7' to 7 'to 8' to 8 '8' to 8 'to Now, the condition lethality of the mutant is higher than that of the mutant. In the case of wild type, the same amount of α and ε are contained in the wild type, and the correction function of α and ε is lower than 1/10. The correction function of the DNA fragment III is related to the unknown function of the DNA fragment III. 2. A method for correcting errors in DNA synthesis system in vitro was established. The correction mechanism maintains the correct degree of A-G and A-C error. A side, correction function to maintain the DNA detection, III, A-C, A-G, A-C, A-C, A 3. Analysis of the function of mutT gene products in the control of high purity: high purity, high purity, The activity of dGTase is very important. The formation of A-G molecules requires a small ratio of dGTP to antisyn, which is expected to be resolved in a specific manner.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Hisaji,Maki: J.Biol.Chem.263. 6570-6578 (1988)
Hisaji,Maki:J.Biol.Chem.263。
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