大腸菌染色体複製における忠実度制御の分子機構の研究

大肠杆菌染色体复制保真度控制的分子机制研究

• 批准号: 63615518
• 负责人: 真木 寿治
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63615518/
• 关键词: DNAポリメラーゼ; 突然変異; DNA複製; 大腸菌

1.DNA合成酵素をコードする遺伝子のミューテーター変異株の解析:大腸菌DNAポリメラーゼIIIホロ酵素の10種のサブユニットのうちαサブユニットはポリメラーゼ活性を、εサブユニットは校正機能に必要な3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を担っていることが知られている。今回、αサブユニットをコードするdnaE遺伝子の条件致死性ミューテーター変異株を分離した。この変異株から精製したDNAポリメラーゼIIIには野生型の場合と同様に等量のαとεサブユニットが含まれていたが、その校正機能は野生型のそれに対し1/10以下に低下していることが明らかになった。このことから、DNAポリメラーゼIIIの校正機能は単にεサブユニットの3'→5'エキソヌクレアーゼだけの働きではなく、αサブユニットの未知の作用が関与していることが強く示唆された。2.試験管内DNA合成系における塩基対形成の誤りとその校正:鋳型としてホモポリマーDNAを用い、それとはワトソン-クリック型の塩基対を形成しないdNTPを基質としてDNA合成を行い、その誤った取り込みをシーケンスゲルで解析する方法を確立した。校正機構を持たないαサブユニットはA-Aペアの形成は許さないがA-GとA-Cの誤った塩基対はある程度形成することが明らかになった。一方、校正機能を持つDNAポリメラーゼIIIはA-Cペアを取り除くことができるが、A-Gペアに対しては働かないことが明らかになった。3.忠実度制御におけるmutT遺伝子産物の機能の酸素学的解析:高純度に精製したMutTタンパク質に上記のA-Gペアの形成を制御する活性を見いだした。このタンパク質はdGTPaseの活性も有していた。A-Gペアの形成には基質のdGTPがsyn型になることが必要であると予想されるので、MutTタンパク質はsyn型だけを特異的に分解することによりdGTPのantisyn変換の比率を小さくしている可能性が示唆された。

1. DNA synthesis enzyme analysis of different strains: Escherichia coli DNA sequencing III enzyme 10 kinds of enzymes in the range of 3'to 5' to 6 'to 7' to 7 'to 8' to 8 '8' to 8 'to Now, the condition lethality of the mutant is higher than that of the mutant. In the case of wild type, the same amount of α and ε are contained in the wild type, and the correction function of α and ε is lower than 1/10. The correction function of the DNA fragment III is related to the unknown function of the DNA fragment III. 2. A method for correcting errors in DNA synthesis system in vitro was established. The correction mechanism maintains the correct degree of A-G and A-C error. A side, correction function to maintain the DNA detection, III, A-C, A-G, A-C, A-C, A 3. Analysis of the function of mutT gene products in the control of high purity: high purity, high purity, The activity of dGTase is very important. The formation of A-G molecules requires a small ratio of dGTP to antisyn, which is expected to be resolved in a specific manner.

项目成果

Masahiro,Akiyama: Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 86. (1989)

秋山正宏：美国国家科学院院刊。

Hisaji,Maki: J.Biol.Chem.263. 6570-6578 (1988)

Hisaji，Maki：J.Biol.Chem.263。