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独立栄養細菌(Thiobacillus属)の宿主・ベクター系の開発

自养细菌（硫杆菌属）宿主载体系统的开发

基本信息

批准号：
63616510
负责人：
田野達男
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.Thiobacillus属細菌の固体培養法の開発:T.ferrooxidansAP19-3株、T.thiooxidans ON106の株の両株を、Silvermanの9K基本培地にエネルギー源として、それぞれ3%FeSO_4及びコロイド硫黄を用いて、ゲル化剤としてアガロース及びゲランガムを使用して固体培養を行い、良好なコロニーを形成させることが出来た。2.ベクターの開発:AP19-3株及びON106株のプラスミドの存在について検討した結果、前者には9.1Kbのプラスミド(pTF1)が存在した。制限酵素地図を作成したところ、EcoR1とPstIの2種の制限酵素による単一切断部位を有していた。そこでpTF1のEcoRI切断部位にpUC19を連結し、ハイブリドプラスミド(pTF101、11.8Kb)を作成した。後者もプラスミドを保有していると推測されたので、1)で確立した固体培養法を用いてsingle cellよりプラスミド(pTT1)を単離した。現在制限酵素地図を作成中である。シャトルベクター構築のためには、協力なプロモーターが必要である。そこで大腸菌のプロモーター検索用プラスミド(pMC1403)を用い、AP19-3株のプロモーター遺伝子のクローニングを行った。その結果、10数株のプロモーター領域挿入プラスミドが得られた。これらの株よりプラスミドを単離し、分析したところ様々の長さのフラグメントが挿入されていることが確立されたので、今後更に小型化し、プロモーター活性の検討や塩基配列の決定を行いたい。3.Thiobacillus属細菌の宿主としての可能性の検討:両菌株について制限・修飾系を検討した結果、ON106株に制限・修飾系の存在が認められた。一方、AP19-3株には制限・修飾系が認められず宿主として使用可能と考えられた。また、同菌株についてスフェロプラスト化の条件を確立することが出来たので、今後、形質転換に利用出来ると考えられる。

1. Development of solid culture method for Thiobacillus: T. ferrooxidans AP19 -3 strain, T.thiooxidans ON106 strain, Silverman 9K basic culture medium with 3% FeSO4 and sulfur. 2. The development of AP19 -3 strain and ON106 strain was investigated. The former was 9.1Kb (pTF1). Two kinds of restriction enzymes, EcoR1 and PstI, are produced in different parts of the body. The EcoRI cleavage site pUC19 of pTF1 is linked to pTF101 and 11.8Kb. The latter method was established using a single cell culture medium. Now limit the enzyme to make it The construction of the schiatral object is a must, and the coordination of force is a must. The E. coli strain pMC1403 was used in the study, and the strain AP19 -3 was used in the study. As a result, more than 10 plants were selected from the field. This is the first time that we have been able to determine the size of the cell, the size of the cell, the activity of the cell, and the length of the cell. 3. The possibility of host degradation of Thiobacillus: the results of the study on the restriction and modification system of strains, the existence of restriction and modification system of ON106 strains One side, AP19-3 strain, limit, modification, recognition, host, use, possibility In addition, the conditions for the transformation of the same strain have been established, and in the future, the physical and qualitative changes will be utilized.