食用担子菌類の宿主-ベクター系の開発

食用担子菌宿主载体系统的开发

• 批准号: 06760078
• 负责人: 千 菊夫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760078/
• 关键词: 担子菌; 宿主-ベクター系; キノコ; ミトコンドリアプラスミド; 自律複製配列; エノキタケ; スエヒロタケ; 遺伝子工学

本研究においてはエノキタケ(Flammulina velutipes)を取り上げ,食用担子菌類の宿主-ベクター系を開発することを目的としている.今回は,(1)ベクターのマーカーに用いるエノキタケTRP1遺伝子の構造解析と機能発現必要最小領域の検討と(2)染色体外自律複製ベクターの構築に必要な自律複製配列(ARS)の検索とそれらの活性と構造の解析を行った.1.エノキタケのTPR1遺伝子の解析 出芽酵母のtrp1変異を抑制するエノキタケDNA断片(7.4kb,TRP1遺伝子を持つ)を欠失させて出芽酵母細胞内での機能発現に必要なDNA領域の限定化を行ったところ,1.6kbにまで切縮めることが可能であった.そこで,この最小領域を含む2.0kbの塩基配列を決定してデータベース検索したところ,エノキタケTRP1がトリプトプァン合成の複数のステップを触媒する単一酵素タンパク質をコードしていることが明らかとなった.また,クローン化TRP1がプロモーター領域およびN末端コード領域を欠いていることが判明したため,現在,これら5'末端領域をクローン化している.2.エノキタケのARSの解析 エノキタケのミトコンドリアプラスミドpFV1およびpFV2から,出芽酵母と分裂酵母のいずれの細胞内でもARS活性を有するDNA断片を,8種類単離した.次に,これらのARSが担子菌細胞内で機能するか否かを明らかにするために,これらのARSをスエヒロタケの染色体組込み型ベクターに連結した.現在,スエヒロタケの形質転換実験を進行中である.一方,8種類のARSのうちpFV2由来のARS1.6kb断片についてその全塩基配列を解析したところ,同断片が多数のARSコンセンサス配列を有しており,DNAポリメラーゼとRNAポリメラーゼをコードしていることが明らかとなった.

In this study, the host of Edible basidium fungi-Flammulina velutipes-was developed. This paper discusses the structure analysis and function development of TRP1 gene in the field of chromosome replication, and discusses the minimum domain of TRP1 gene in the field of chromosome replication.(2) The structure analysis of ARS gene in the field of chromosome replication, and the activity of TRP1 gene in the field of chromosome replication.(7.4kb, TRP1 gene) is necessary for the functional development of budding yeast cells, and the restriction of DNA domain is possible for 1.6kb DNA domain. In this case, the smallest domain contains 2.0 kb of base sequence, and the most important domain is TRP1. The most important domain is TRP1. 2. Analysis of TRP1 and TRP2 in budding yeast and splitting yeast. DNA fragments were found in 8 species isolated from each other. Next, the ARS is a member of the Basidiomycete family. Now, we're in the middle of something. One side, 8 kinds of ARS of pFV2 origin of ARS 1.6kb fragment in the middle of the whole base alignment analysis, the same fragment for most of the ARS gene in the middle of the base alignment analysis,DNA mixture in the RNA mixture.