权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

好熱性古細胞における宿主ベクター系の開発

嗜热古细胞宿主载体系统的开发

基本信息

批准号：
04680185
负责人：
山岸明彦
金额：
--
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1 1)まず超好熱性古細菌スルホロバスにおいて、カルシウム法による形質転換の検討を行った。スルホロバスのウラシル要求性株を培養し、いくつかの条件でカルシウムによる処理をおこなったのち、野生型株の染色体DNAと混合し、いくつかの条件で放置の後最少培地上にプレートした。復帰変異効率を大きく上回る形質転換効率は得られず、電気穿孔法による形質転換が必要であることが明かとなった。2)同時に好熱性古細菌サーモプラズマの野生型株を、いくつかの条件で培養の後に、ノボビオシン耐性株の染色体DNAと混合放置の後、ノボビオシンプレートで形質転換株を同定した。やはり有為な形質転換株は得られなかった。3)スルホロバスにおいて、電気穿孔法による形質転換を試みた。ある条件下で、形質転換株と思われるコロニー数の増加が認められた。今後の検討が必要であるが今後この方法での形質転換は有望と思われる。2 1)マーカーとして利用可能な遺伝子として、5-フルオロオロト酸耐性に関与している遺伝子pyrEのクローニングのために、高度好熱菌サーマスにおいてpyrE遺伝子を発現スクリーニングするためのベクターを作成した。2)サーモプラズマのプラズミドの一部を大腸菌内にクローニングし、その塩基配列を決定した。少なくとも 128残基のオープンリーディングフレームが存在した。プラズミドの複製等になんらかの役割を持っている可能性がある。3)決定された塩基配列を元にプライマーを作成し、PCRによって低能度のプラズミドを増幅検出することが出来た。これをマーカーとして用いることが出来る。以上、電気穿孔法による形質転換法の検討、マーカーの作成ともに、半年の研究期間での目標は100%達成した。

1) The study of morphological changes in superthermophilic archaea was carried out by means of the method of culture. Chromosome DNA of wild-type strain is mixed with chromosome DNA of wild-type strain after culture and treatment. The quality of the material is different from the quality of the material. 2)At the same time, the conditions for the development of thermophilic archaea were determined after culture, after mixing of chromosomal DNA of resistant strains, and after the development of thermophilic archaea. There is no way to change the quality of the plant. 3) The quality of the material was tested by electroporation. Under these conditions, the quality of the plant changes and the number of plants increases. Future discussions are necessary, future methods are expected, and future discussions are expected. 2 1) To make use of the possible gene, 5-amino acid tolerance, acid tolerance, and high temperature gene, pyrE gene can be used to develop the gene. 2) A part of the genome of E. coli is determined by the nucleotide sequence of E. coli. A small number of residues 128 are present. The possibility of a copy of a 3)The determination of the base sequence is based on the determination of the base sequence.これをマーカーとして用いることが出来る。The purpose of this study was achieved 100% during the half year period.