好熱性古細胞における宿主ベクター系の開発

嗜热古细胞宿主载体系统的开发

• 批准号: 04680185
• 负责人: 山岸 明彦
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680185/
• 关键词: 超好熱菌; 古細菌; スルホロバス; サーモプラズマ; 形質転換; プラズミド; フルオロオロト酸; ノボビオシン

1 1)まず超好熱性古細菌スルホロバスにおいて、カルシウム法による形質転換の検討を行った。スルホロバスのウラシル要求性株を培養し、いくつかの条件でカルシウムによる処理をおこなったのち、野生型株の染色体DNAと混合し、いくつかの条件で放置の後最少培地上にプレートした。復帰変異効率を大きく上回る形質転換効率は得られず、電気穿孔法による形質転換が必要であることが明かとなった。2)同時に好熱性古細菌サーモプラズマの野生型株を、いくつかの条件で培養の後に、ノボビオシン耐性株の染色体DNAと混合放置の後、ノボビオシンプレートで形質転換株を同定した。やはり有為な形質転換株は得られなかった。3)スルホロバスにおいて、電気穿孔法による形質転換を試みた。ある条件下で、形質転換株と思われるコロニー数の増加が認められた。今後の検討が必要であるが今後この方法での形質転換は有望と思われる。2 1)マーカーとして利用可能な遺伝子として、5-フルオロオロト酸耐性に関与している遺伝子pyrEのクローニングのために、高度好熱菌サーマスにおいてpyrE遺伝子を発現スクリーニングするためのベクターを作成した。2)サーモプラズマのプラズミドの一部を大腸菌内にクローニングし、その塩基配列を決定した。少なくとも 128残基のオープンリーディングフレームが存在した。プラズミドの複製等になんらかの役割を持っている可能性がある。3)決定された塩基配列を元にプライマーを作成し、PCRによって低能度のプラズミドを増幅検出することが出来た。これをマーカーとして用いることが出来る。以上、電気穿孔法による形質転換法の検討、マーカーの作成ともに、半年の研究期間での目標は100%達成した。

1 1) The superthermophilic archaea スルホロバスにおいて, the カルシウム法によるmorphosis転changeの検问を行った.スルホロバスのウラシルRequired strainをcultivationし、いくつかのconditionsでカルシウムによるtreatmentをおこなったのち, wild-type strain chromosomal DNA and mixed し, いくつかの condition で placed on the ground at least にプレートした. The efficiency of the complex change is large and the efficiency of the change of shape and quality is high, and the electric perforation method is necessary for the change of shape and quality. 2) Simultaneously cultivate the thermophilic archaea サーモプラズマのwild-type strain を, いくつかのconditions and then culture it, ノボビAfter the chromosomal DNA of the resistant strain was mixed and placed, the new strain was changed into the same shape and quality. The やはり has the shape and quality of the 転 and the strain has been changed into the られなかった. 3) スルホロバスにおいて, electro-perforation method and によるmorphological change をtest みた. Under the same conditions, the shape and quality of the strains are changed, and the number of strains is increased and the number of strains is increased. In the future, it is necessary and necessary, and in the future, the method will be changed, and the shape and quality will be changed, and it will be expected and thought. 2 1) The use of マーカーとして is possible, な伝子として, 5-フルオロオロトacid-tolerant and している缝子pyrEのクローニングのために、Highly thermophilic bacteria サーマスにおいてpyrE伝Sub-を発 appear now スクリーニングするためのベクターを成した. 2) サーモプラズマのプラズミドの一 を にクローニングし and その塩base arrangement をdetermination in the coliform bacteria. There is less 128 residues of のオープンリーディングフレームが.になんらかのservice cut をhold っている possibility がある. 3) Determine the basic alignment of the base and the low-energy PCR of low-energy PCR.これをマーカーとして Use いることが出る. Above, the electroporation method and the shape change method are discussed, the machining method is produced, and the goal of the half-year research period is 100% achieved.