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ロドコッカス(Rhodococcus)属微生物の遺伝子組換え系(宿主・ベクター系)の開発

红球菌属微生物基因重组系统（宿主载体系统）的开发

基本信息

批准号：
04F04200
负责人：
小林達彦
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

Rhodococcus属は難分解性化合物分解能が高く、環境浄化のみならず有用物質生産に利用されつつある。また、有機溶媒耐性と強い酸化還元能を有する為、特殊なバイオプロセス環境下の次世代宿主の候補として挙げられている。本研究では、昨年度構築に成功した(Rhodococcus rhodocurous J1菌由来のニトリラーゼ誘導発現系を基に開発した新規誘導発現ユニットを有する)Rhodococcus属用の誘導型高発現ベクターpREIT19の機能性を確認した。グラム陰性細菌Pseudomonas putida N19-2株のイソニトリルヒドラターゼを対象として発現検討を行った結果、誘導剤を添加した場合においてのみ本酵素がSDS-PAGE上で著量発現しているのを確認することが出来た。様々なロドコッカス属微生物を宿主として導入しpREIT19が利用可能なロドコッカス属微生物の宿主域を調査した。その結果、誘導剤を添加した場合においてのみ、R.erythropolis PR4株をはじめ、R.fascians、R.ruber、R.rhodochrous、R.percolatus、R.opacusや(R.erythropolis PR4株とは異なる)2種類のR.erythropolisの菌株で複製・機能することを実証した。誘導発現効果はイソバレロニトリルのみならず、ε-カプロラクタムの場合でも確認でき、これらの結果はロドコッカス属微生物で広く利用可能、即ち幅広い宿主域で機能できることを示唆している。

Rhodococcus is a kind of refractory compound, which can be decomposed into high energy, environmental protection and useful substance production. For example, organic solvent tolerance, strong acidification, and other potential host species, the next generation of host species may be selected under special conditions. In this study, we successfully constructed a new inducible development system for Rhodococcus rhodocus J1 and confirmed the functionality of inducible high-level development system pREIT19. The results of the detection and identification of this enzyme by SDS-PAGE of Pseudomonas putida N19-2 strain were analyzed. pREIT19 was introduced to investigate the possible use of host domains of genus microorganisms. In addition to the results, induction agents were added to two strains of R.erythropolis, R.fascians, R.ruber, R.rhodochrous, R.percolatus, R.opacus and (R.erythropolis PR4 strains). In the case of induction, it is necessary to confirm whether or not the microorganism belongs to the group of microorganisms, and whether or not the microorganism can utilize the function of the host domain.