微生物による穀物形質転換系の開発

利用微生物开发谷物转化系统

• 批准号: 63616513
• 负责人: 我彦 広悦
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Akita Prefectural College of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63616513/
• 关键词: T-DNAの構造; バイナリーベクター; アグロバクテリウム; プロトプラスト

本研究ではAgrobacterium菌によるイネの形質転換を試みる。まず新しい菌を分離し、これらの持つTiプラスミドの性格づけを行なった。秋田県に存在するクラウンゴールからAgrobacteriumを採取し、代表的なノパリン型株4種を得た。これらは6種の異なる植物に腫瘍を誘発し、広宿主城を持つことがわかった。次にT-DNAをクローニングし、制限酵素地図を作成した。オーキシン、サイトカイニン合成遺伝子を含む領域は3種の菌については保存され、1種については異なっていた。それ以外の領域については、特定の部位に菌に依存した長さの挿入が起こっていることが明らかとなった。これらAgrobacteriumのイネへの感染を試みる目的でベクター系を作成した。まず植物形質転換用バイナリーベクターpBI101の改変を行なった。相同組み換えによりイネ染色体への組み込み頻度を高くするという可能性を念頭に起き、イネ反復DNAであるSacIの1kb断片を上記ベクターにクローン化した。3者昆合実験により、このクローンとそれぞれのTiプラスミドを持つAgrobacteriumを作成した。一方、イネ(秋田コマチ)については、種子の胚からカルスを誘導した。これを液体培養にし、比較的小さな細胞塊が得られる迄継代した。細胞壁分解酵素処理によりプロトプラストを調整した。現在これから細胞への再生と植物体への再分化を試みている。今後プロトプラストへ上記のAgrobacteriumを感染させ、マーカーとなるカナマイシンおよびハイグロマイシン耐性による形質転換体の選択を試みる予定である。

This study is based on the experiment of changing the shape and quality of Agrobacterium bacteria.まず新しい germをisolationし、これらのholdつTiプラスミドのcharacter づけを行なった. Akita Prefecture has four types of Agrobacterium-type strains, including Agrobacterium and Agrobacterium.これらは6 kinds of different plants, にswelling, inducing 発し, and 広host castle, つことがわかった. Sub-T-DNA DNA and restriction enzyme enzymes are produced.オーキシン, サイトカイニンsynthetic legacy 伝子をcontaining field は 3 kinds of bacteria については preservation され, 1 kind of については different なっていた.それの区については、Specific parts of the bacteria にdependence した长さのINSertが出こっていることが明らかとなった.これらAgrobacteriumのイネへのinfectionをtrialみるpurposeでベクターsystemを成した. The まず plant shape 転 is replaced with the バイナリーベクターpBI101の成変を行なった. The same group of chromosomes is replaced by the same group of chromosomes. The frequency is high and the probability is high. The thought arises.き, イネ Repeat DNA であるSacIの1kb fragment を上记ベクターにクローン化した. 3. Kunhe 実験により, このクローンとそれぞれのTiプラスミドをhold つAgrobacteriumを成した. One side, イネ(Akita コマチ) については, seed のEmbryo からカルスをinducing した. The これを liquid culture にし, the comparative small さな cell block がget られる until the 継Shiro した. Cell wall decomposing enzyme treatment is used to adjust the cell wall decomposing enzyme. Now the cells are regenerated and the plant body is redifferentiated.プロトプラストへ上记のAgrobacteriumをInfectionさせ、マーカーとなるカナマイシンおよびハイグロマイシンresistant によるmorphosis転 Body-changingの选択をtrialみるpredeterminedである.

项目成果

H.Wabiko: Archives of Microbiology. (1989)

H.Wabiko：微生物学档案。