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サル初代培養神経細胞による変性疾患の研究

利用原代培养猴神经元研究退行性疾病

基本信息

批准号：
63623513
负责人：
黒田洋一郎
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63623513/
关键词：
ニューロン培養細胞パーキソン病サル胎児脳神経毒性

项目摘要

1.サル成体脳をとり出し、黒質部分、大脳皮質部分などを摘出し、パパインなどの分解酵素を用いて、細胞をバラバラにした。これらの細胞をポリ-L-リジンでコートしたウエルにまいて、CO_2インキュベーター中で培養した。分解酵素で遊離した細胞の生存率は10%以下、培養開始後3日間で、ほとんどの生細胞は死滅した。サル成体脳を用いて、現在の技術と摘出法で行う限り、ニューロンの培養は非常に困難であることが、確認された。2.次の可能性として、サル胎児脳を用いての実験が考えられたが、一般に日本のみならず、一定の週令のサル胎児脳を定期的に入手することは不可能と考えられていた。しかし、筑波霊長類実験センターで、多数のサルの飼育、繁殖が試みられ、最近、順調な繁殖が恒常化したとの情報を得たので、胎児脳の入手のための共同実験の申請を行った。3.昭和63年12月に、ようやく申請に対する許可が出、胎児脳の週令による、培養ニューロンの生存率の違いの検討と組織凍結法の是非の検討から着手した。4.胎生108日のサル(Czaum Ranup Length11.0cm)胎児から脳をとりだし、黒質部分、大脳皮質(前頭葉・後頭葉・側頭葉)・小脳などに分切し、パパインを用いて、細胞をバラバラにして培養した。細胞をバラバラにした時点で、細胞の生存率が15〜30%で、5日間の培養後、生きたニューロンはほとんど見られなくなった。5.より若い胎児脳が適当と考えられたので、胎生80日前後のサル胎児の使用と、DMSO液中での液体窒素による凍結法を検討中である。培養が成功すれば、パーキソン病原因物質の判定に使える。

1. The adult part is extracted from the black part and the large cortex part, and the decomposing enzyme is used in the cell. The cells were cultured in CO_2 medium. The survival rate of dissociative enzyme free cells was less than 10%, and the survival rate of living cells was less than 10% after 3 days of culture. It is confirmed that there are limitations to the use of existing technologies and extraction methods, and that the cultivation of natural products is very difficult. 2. The second possibility is that the child will be used in the middle of the study, and the third possibility is that the child will be used in the middle of the study. For example, if you are a child, you can choose to have a child. If you are a child, you can choose to have a child. 3. In December 1963, we began to examine the issue of license, fetal survival rate, and tissue freezing method. 4. 108 days after birth (Czaum Ranup Length11.0cm) fetal development, black part, large cortex (anterior head leaf, posterior head leaf, lateral head leaf), small cortex, cutting, use, cell culture. The survival rate of cells is 15 ~ 30% at the time of cell culture. After 5 days of culture, the survival rate of cells is 15 ~ 30%. 5. If the fetus is properly examined, the use of the fetus before and after 80 days of birth, the liquid in DMSO solution, and the freezing method are discussed. Culture is successful, and the determination of the causative substance of the disease is carried out.