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副腎皮質ミトコンドリアのチトクロムP-450関連酵素の局在に関する細胞化学的研究

细胞色素P-450相关酶在肾上腺皮质线粒体定位的细胞化学研究

基本信息

批准号：
63635505
负责人：
高楠彰
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

種々の免疫電子顕微鏡法を用いて、ウシ副腎皮質におけるアドレノドキシンの局在を検討したところ、1、同一細胞内ミトコンドリア間のheterogeneityの問題……(1)preembedding法では同一細胞内ミトコンドリア間における酵素含有量は不均一であったが、クリオスタット切片表面のミトコンドリアは切片内部のミトコンドリアに比べてより多くの割合で標識された。これに対して(2)post-embedding法と、(3)凍結超薄切片を用いたnon-embedding法では、実質細胞の全てのミトコンドリアが同酵素を含み、同一細胞内ミトコンドリア間における酵素含有量は均一であった。以上の結果より、pre-embedding法においてのみ認められる不均一性は、抗体のミトコンドリア内部およびクリオスタット切片内部への浸透の不均一性に起因することが示唆された。(備品2点は、イムノブロット法に用いた。)2、副腎皮質各層間におけるミトコンドリア内酵素含有量の比較……post-embedding法で、ミトコンドリア単位断面積当りのアドレノドキシン含有量(標識された金粒子の数)を副腎皮質各層で比較したところ、束状層と網状層においては同程度であるが、球状層においては、束状層の2-3分の1であり、副腎皮質各層間でミトコンドリア内アドレノドキシン含有密度に差があることが分かった。3、ミトコンドリア内顆粒における局在の問題……アドレノドキシンの局在は、実質細胞ミトコンドリアのマトリックス及び内膜に認められた以外に、球状層、束状層外層部の実質細胞ミトコンドリア内に頻繁に認められる丸く電子密度の高い顆粒内にも認められ、この顆粒においてステロイドの水酸化反応がおこっている可能性が示唆された。今後は、1、2、3、についてP-450(SCC)及びP-450(11β)に関しても行うと共に、蛋白質のみならずmRNAの局在についても検討したい。

1. heterogeneity of different enzymes in the same cell.(1)Preembedding method: different enzymes in different cells. The surface of the slice is divided into two parts: the surface of the slice is divided into three parts: the surface of the slice is divided into four parts: the surface of the slice is (2)Post-embedding method and (3) Freezing ultra-thin section method are used in the whole process of cell culture. The enzyme content is uniform in the same cell. These results indicate the cause of heterogeneity in the pre-embedding method, and heterogeneity in the penetration of antibodies into the interior and into the interior of sections. (2 points) 2. Comparison of enzyme content in different layers of accessory kidney cortex by post-embedding method The number of gold particles in the bundle layer and the reticular layer is the same, the globular layer is the same, the bundle layer is 2-3 minutes, and the density difference between the layers of the adrenal cortex is the same. 3. The problem of particle size distribution in the outer layer of the spherical layer and fascicular layer is that the particle size distribution in the outer layer of the spherical layer and fascicular layer is frequent and the electron density is high. The possibility of acidification of the particles was discussed. In the future, P-450(SCC) and P-450(11β) will be detected in 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 10,