ミトコンドリアのチトクロムP-450の細胞内局在化機構

线粒体细胞色素P-450的亚细胞定位机制

基本信息

批准号：
63635503
负责人：
伊藤明夫
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

副腎皮質細胞においてステロイドホルモンの生合成に関与しているチトクロムp-450(SCC)およびチトクロムp-450(11β)のミトコンドリアの局在化機構に関して、次の3つの方向から検討した。1.チトクロムp-450(SCC)前駆体分子内に存在するミトコンドリアへの局在化シグナルの解析:チトクロムp-450(SCC)前駆体に対するcDNAを改変して前駆体分子に様々な欠失やアミノ酸置換を行いミトコンドリアへの移入の様子を調べた。局在化シグナルは前駆体延長ペプチドのアミノ末端から19アミノ酸残基の中に含まれていた。次に、延長ペプチドのアミノ末端部に点在している塩基性アミノ酸の役割を調べるため^4Arg→Ser、^9Arg→Ser、^<14>Lys→Thrの置換を行ったところ、塩基性アミノ酸1残基存在すれば前駆体のミトコンドリア表面への結合は起こるが、移入には3残基全て存在することが必要であった。2.チトクロムp-450(SCC)前駆体と結合するミトコンドリア蛋白質の検索:前駆体分子を認識し、ミトコンドリア内に輸送する過程に関与している蛋白質をチトクロムp-450(SCC)前駆体の延長ペプチドのアミノ末端部20残基に相当するペプチドを化学合成し、これと反応する蛋白質として単離することを試みた。化学合成ペプチドが分子量約32KDaの細胞骨格蛋白質と類似した性質を示す蛋白質と特異的に結合することを見つけ、現在これに精製中である。3.延長ペプチドを切断除去するプロテアーゼの精製:ラット肝ミトコンドリアマトリクスよりプロセシングプロテアーゼを均一に精製した。金属プロテアーゼの一種で分子量55KDaおよび52KDaの2つのサブユニットから成り、アドレノドキシン、チトクロムp-450(SCC)、p-450(11β)前駆体の延長ペプチドをエンドプロテアーゼ作用により切断した。現在、本酵素のcDNAクローニングを行っている。

从三个方向研究了细胞色素P-450（SCC）和细胞色素p-450（11β）的线粒体定位机制，它们与肾上腺皮质细胞中类固醇激素的生物合成有关。 1。对细胞色素P-450（SCC）前体分子中存在的定位信号的分析：细胞色素P-450（SCC）前体的cDNA修饰，以研究前体分子中各种缺失和氨基酸取代的线粒体的转移。来自前体延伸肽的氨基末端的19个氨基酸残基中包含定位信号。接下来，为了研究散布在延伸肽的氨基末端的碱性氨基酸的作用，我们进行了 ^4arg→Ser， ^9arg→Ser的取代， ^9arg→ser， ^<14> lys→Thr，当存在一个基本氨基酸残基时，前体存在与线粒体表面相结合的前体，但要出现三分之二的残基，但所有的氨基酸都存在。 2。搜索与细胞色素P-450（SCC）前体结合的线粒体蛋白：我们试图化学合成与细胞色素P-450（SCC）前体延伸延伸肽的氨基末端的20个残基相对应的肽，并像蛋白质一样孤立与它反应的蛋白质。我们发现，化学合成的肽特异性结合与蛋白质的结合，该蛋白质表现出类似于大约32 kDa分子量的细胞骨架蛋白的特性，目前正在纯化。 3.蛋白酶裂解并去除延伸肽：加工蛋白酶是从大鼠肝脏线粒体基质中均匀纯化的。肾上腺素毒素，细胞色素P-450（SCC）和P-450（11β）前体的延伸肽，由两种分子量的55 kDa和52 kDa组成，被内孕症作用裂解。目前，正在进行该酶的cDNA克隆。