ミトコンドリアのチトクロムP-450の細胞内局在化機構

线粒体细胞色素P-450的亚细胞定位机制

• 批准号: 01635506
• 负责人: 伊藤 明夫
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-01635506/
• 关键词: チトクロムP-450(SCC); ミトコンドリア; 細胞内局在化シグナル; 受容体; 延長ペプチド; プロセシングプロテア-ゼ

副腎皮質細胞においてステロイドホルモンの生合成に関与しているチトクロムP-450(SCC)、チトクロムP-450(11β)、および小胞体においてチトクロムP-450系に関与しているチトクロムb_5が生合成されてから、機能発現の場であるミトコンドリアや小胞体に局在化される機構に関して次の3点から検討した。(1)チトクロムP-450(SCC)およびチトクロムP-450(11β)前駆体と相互作用をもつミトコンドリア蛋白質の検索:2種のP-450の前駆体分子の認識や、ミトコンドリア内への輸送に関与している蛋白質をこれらの前駆体の延長ペプチド約20残基のペプチドを化学合成し、これと相互作用(結合)をする蛋白質として単離、同定を試みた。約70KD、約45KDなどの蛋白質が身い出された。現在、これらの蛋白質の精製と役割について検討中である。(2)チトクロムP-450前駆体の延長ペプチドを切断するプロテア-ゼのcDNAクロ-ニング:ラット肝ミトコンドリアマトリクスから精製された延長ペプチド切断プロテア-ゼに対する抗体を用いて、ラット肝cDNAライブラリ-(入gt11)よりこの酵素に対するcDNAを検索した。プロセシングプロテア-ゼの2つのサブユニットのうち、52KDサブユニットに対するcDNA(35kbp)が得られ、塩基配列を決定している。また、55KDのサブユニットの前長を含むcDNAをスクリ-ニングしている。(3)チトクロムb_5の小胞体膜局在化シグナル:ラット肝のチトクロムb_5に対するcDNAを改変してそのアミノ末端側の親水性部とカルボキシ末端側の疎水性部をそれぞれ欠失したり、他の蛋白質と結合した融合蛋白質をつくり、これらを哺乳動物細胞で発現させ、細胞内局在場所を解析した。カルボキシ末端側の疎水性部をもつ融合蛋白質はいずれも小胞体に局在することから、この部分に局在化シグナルが存在することが明らかになった。

The relationship between the biosynthesis and function development of accessory renal cortical cells and SCC P-450(SCC), SCC P-450(11β), SCC P-450 and SCC P-450 system is discussed. (1)P-450(SCC) is a precursor of P-450(11β) and its interaction is a key factor in protein synthesis. Two kinds of P-450 precursor molecules are identified and studied. About 70KD, about 45KD, the protein content of the body is very high. Now, the protein is refined and refined. (2)The cDNA library of the P-450 precursor was purified and the antibody was used to detect the cDNA library of the enzyme. PROSENCE PROTETA-2-inch server, the corresponding cDNA(35kbp) for the 52KD server, and the base configuration can be determined. 55KD (3)The membrane structure of small cell of CDRB_5 is changed in the process of transformation, and the hydrophilic part on the terminal side of CDRB_5 is changed in the process of transformation, and the fusion protein is changed in the process of transformation, and the intracellular structure is changed in the process of analysis. The fusion protein is located in the middle of the small cell and exists in the middle of the small cell.

项目成果

T.Kumamoto,A.Ito,T.Omura: "Crifical Region in the Exteusion Peptide for the Import of Cytochrome P-450(SCC)Precursor into Mitochondria" J.Biochem. 105. 72-78 (1989)

T.Kumamoto、A.Ito、T.Omura：“将细胞色素 P-450 (SCC) 前体导入线粒体的挤出肽中的关键区域”J.Biochem。

W-J.Ou,A.Ito,H.Okazaki,T.Omura: "Purification and Characterization of a Processing Protease from Rat Liver Mitochondria" EMBO J. 8. 2605-2612 (1989)

W-J.Ou、A.Ito、H.Okazaki、T.Omura：“大鼠肝脏线粒体加工蛋白酶的纯化和表征” EMBO J. 8. 2605-2612 (1989)