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胃壁細胞H^+/K^+ATPaseの制御機構

胃壁细胞H^+/K^+ATP酶的调控机制

基本信息

批准号：
63641519
负责人：
二井將光
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63641519/
关键词：
胃壁細胞 H^+K^+ATPase ピリドキサールーリン酸

项目摘要

胃壁細胞に存在するH^+/K^+ATPaseは胃酸の分泌に関与している。このATPaseは神経、ホルモンおよびヒスタミンの支配により変動することが知られている。しかし詳細な機構は不明である。本研究に於いてはまずH^+/K^+ATPaseに注目し、ブタの胃壁細胞よりcDNAをクローン化し塩基配列を決定した。推定したアミノ酸配列中にプロテインキナーゼによるリン酸化部位を同定した。これは本酵素がリン酸化によって調節されている可能性を示唆している。本酵素のアミノ酸配列はNa^+/k┣D1+ATPase、Ca┣D12+┫D1ATPase等他のイオン輸送性ATPaseと高い保存性を示した。cDNAの塩基レベルで保存性の低い部分を用いてヒトのライブラリーから、H┣D1+┫D1/K┣D1+┫D1ATPaseの遺伝子DNAをクローン化した。このクローンの塩基配列を決定したところ、exon/intronの境界の位置はNa┣D1+┫D1/k┣D1+ATPaseのものとほぼ一致した。したがってH┣D1+┫D1/K┣D1+┫D1、Na┣D1+┫D1/k┣D1+ATPaseは遺伝子のレベルに於いてもきわめて近縁であることが明らかとなった。cDNAを用いてH┣D1+┫D1/K┣D1+┫D1ATPaseの発現系を構築した。以上の成果により、このATPaseの遺伝子の特異的発現機構を明らかにする基礎が確立した。H^+/K^+ATPaseはピリドキサールリン酸(PLP)によって特異的に阻害され、この阻害はATPを添加しておくと見られなかった。さらに^3H-PLPを用いて解析したところ、H^+/K^+ATPase1分子にPLP1分子が結合した。キモトリプシン処理後、ペプチドをHPLCにより分析したところ、PLPはLys-497に結合していた。本酵素の1次構造上にフルオレツセイン、イソチオシアネート(Lys-518)、アデノシントリフォスフォピリドキサール(Lys-70.8)フルオロスルフォニルベンゾイルアデノシン(Lys-736)等の結合部位を見出し、本酵素の活性中心のモデルを提出した。

The presence of H^+/K^+ATPase in secretory tubules is associated with gastric acid secretion. The ATPase is active in the brain, in the brain, and in the brain. Details of the organization are unclear. The aim of this study was to determine the nucleotide sequence of H^+/K^+ATPase and its secretory tubule cDNA. It is estimated that the acid sequence is similar to that of the acid sequence. This enzyme is responsible for the regulation of enzyme activity. This enzyme has been shown to be highly conserved in the form of Na^+/K ^D1+ATPase, Ca ^D12+^D1ATPase and other transport enzymes. The lower part of the cDNA gene is conserved. The lower part of the cDNA gene is conserved. The base alignment of the enzyme is determined by the position of the exon/intron boundary, and the position of the Na + D1/k ATPase boundary. H1 + D1/K D1 + D1, Na D1+ D1/K D1+ATPase Construction of a cDNA expression system for H + D1/K + D1ATPase These results establish the basis for the development of specific mechanisms for ATPase gene expression. H^+/K^+ATPase is a specific inhibitor of ATP. H-PLP binding to H^+/K^+ATPase 1 After the treatment, the HPLC analysis was carried out and the PLP was combined with Lys-497. The primary structure of this enzyme is characterized by the presence of binding sites such as the amino acid sequence, the amino acid sequence (Lys-518), the amino acid sequence (Lys-70.8), and the amino acid sequence (Lys-736).