水チャンネルの多様性のルーツと機能分化の研究:新規水チャンネルの機能解析と生理的意義の解明

水道多样性和功能分化的根源研究：新水道的功能分析及其生理意义的阐明

基本信息

批准号：
13137209
负责人：
石橋賢一
金额：
$ 44.61万
依托单位：
Clinical research Center, Chiba-East National Hospital, National Hospital Organization (2004)Jichi Medical University (2001-2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

アクアポリン11(AQP11)ノックアウトマウスの解析と、線虫のアクアポリン(AQP-CE1~AQP-CE11)の解析を中心におこなった。AQP11がないと嚢胞腎になって腎不全で生後1ヶ月で死ぬ。嚢胞ができる前に近位尿細管に空胞ができるがこれが小胞体を中心とした拡張であることが電顕でわかっていたが、その原因として細胞内オルアネラのpH異常が関与している可能性があきらかになった。これは近位尿細管細胞の初代培養でノックアウトマウス由来のはエンドソームのpHの低下がよわくなっていたことからの類推である。また、ノックアウトマウスの異常がAQP11の直接作用によることが、抗体による組織染色で近位尿細管細胞のみが染まり、また細胞膜ではなく細胞内が染色されることから類推される。まだ空胞変性から嚢胞形成に至る過程が不明である。また培養株細胞(HEK細胞))にGFPでラベルしたAQP11を一過性に発現させると、やはり細胞膜には発現せず、細胞内にとどまっているが、小胞体マーカーと一致して発現しており、in vivoの発現様式に類似していた。空胞ができる1週令の腎臓のRNAのマイクロアレイを行い2倍以上変化する遺伝子を10同定し解析中である。腎臓皮質に限局した嚢胞腎の症例はみあたらなかった。生き延びた稀なノックアウトマスは子孫をつくれるが、精巣の萎縮、とくに精細管上皮の細胞数の減少がみられた。線虫のアクアポリンすべてについてプロモーターの下流にGFPをつけて発現細胞の同定をおこなった。オーバーラップした発現が観察された。また11個のアクアポリンすべてについてRNAiによる遺伝子破壊をおこなったところフェノタイプの異常は認められなかった。オーバーラップしたアクアポリンによる代償で異常が認められなかった可能性もあるので2重。3重の遺伝子破壊を計画している。

水通道蛋白11（AQP11）基因敲除小鼠的分析和线虫水通道蛋白（AQP-CE1至AQP-CE11）的分析。没有AQP11，他将成为囊性肾脏，并在出生后一个月因肾衰竭而死。在形成囊肿之前，在近端小管中形成了液泡，但是电子显微镜表明，这是以内质网上为中心的扩张，但很明显这可能是由细胞内骨内pH的异常pH引起的。这是一个类比，从敲除小鼠的近端管状细胞的原发性培养物中增加了内体的pH值。此外，据推断，基因敲除小鼠的异常是由AQP11的直接作用引起的，因为抗体染色的组织染色仅近端肾小管细胞，细胞内细胞而不是细胞膜。从液泡变性到囊肿形成的过程仍然未知。此外，当暂时表达在培养细胞（HEK细胞）中标记为GFP标记的AQP11时，它没有在细胞膜上表达并留在细胞内，但与内质网表示，与内质网表示，与体内表达模式相似。我们从1周大的肾脏中获得了微阵列RNA，该肾脏形成真空吸尘器，并确定了10个基因，这些基因变化了，这些基因的变化是尽可能多的两倍，并且目前正在分析它们。未发现囊性肾脏疾病的病例。罕见的幸存敲除质量可以产生后代，但是观察到睾丸萎缩，尤其是生精管上皮的细胞计数。所有线虫水通道蛋白通过启动子下游的GFP鉴定。观察到重叠的表达。此外，RNAi均进行了所有11种水通道蛋白的基因破坏，并且在表型中未观察到异常。由于水白通道蛋白重叠的成本，可能没有观察到异常，因此这会加倍。他们计划摧毁三个基因。