ES細胞からの内胚葉細胞系譜制御遺伝子プロファイリング解析

ES 细胞的内胚层细胞谱系控制基因谱分析

• 批准号: 15011246
• 负责人: 粂 昭苑
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011246/
• 关键词: 胚性幹細胞; 試験管内分化誘導; 内胚葉誘導; pdx1; 膵臓; β細胞; 再生医学; 遺伝子プロファイリング

申請者らが構築したES細胞から膵への分化誘導系において、アフリカツメガエルのmixファミリーのニワトリホモログであるc-mix遺伝子を強制発現させた結果、膵への分化誘導能が促進されたことを見い出している。このc-mix遺伝子強制発現ES細胞株と、対照株との遺伝子発現プロファイリング解析を行い、内胚葉誘導に関与する遺伝子群の同定出来ると考えられた。本研究ではDNAチップを用いた遺伝子解析を行なうと共に、rt-pcr法により、遺伝子導入株では内胚葉分化マーカーの発現が上昇していることを示した。今後はここで絞られた候補について、さらにアフリカツメガエル初期胚で強制発現させ、内胚葉誘導活性についてスクリーニングを続ける予定である。さらに、pdx-1-GFPトランスジェニックマウスより、ES細胞を樹立し、生きた状態でpdx-1の遺伝子発現を追跡可能の系を確立した。また、申請者らはこれまでに、ES細胞からの膵への分化誘導を支持する細胞を複数同定してきた。これら支持細胞を用いて、ES細胞から膵へ効率良く分化誘導された。さらに、ES細胞からの分化誘導の条件を無血清条件でアッセイできる系を確立し、TGFβ2を添加することにより、顕著な膵分化誘導を認めた。このように、これまでに確立した実験系では、充分に効率よくES細胞から膵へ分化を誘導することができたので、ES由来の膵幹細胞を今後セルソーターを用いて純化し、遺伝子発現プロファイリングなどによる細胞生化学的解析を進めようと考えている。

The requestor is responsible for ES cell differentiation. It is important to know that the system is sensitive, that is, mix cell differentiation is important, and that c-mix data is used to strengthen the results, and that the differentiation guide can promote the performance of the system. The ES cell line was forced to be detected by the c-mix gene, the cell line was analyzed, and the subgroup of the endodermis gene and the gene subgroup were identified together. In this study, we used the method of DNA and rt-pcr to analyze the characteristics of endoderm differentiation, endodermis differentiation and so on. In the future, we need to know that the embryo is in the early stage of the disease, and that the endoderm is active in the early stage. The following is the case: pdx-1-GFP, ES, pdx-1, and so on. It is possible that the chase is confirmed. Both the applicant and the applicant are required to determine the number of cells in the same number as that of the ES. The rate of good differentiation and guidance of cell differentiation is supported by the use of cell cycle and ES cell cycle. Serum conditions, serum conditions In order to make sure that the system is in good condition, the rate of ES cell differentiation is very high, and the origin of ES is very important. In the future, in the future, the analysis of cell biochemistry is very important.

项目成果

Saneyoshi, T., Kume, S., Mikoshiba, K.: "Calcium/calmodulin-dependent protein kinase I in Xenopus laevis"Comp.Biochem.Physiol.B Biochem.Mol.Biol.. 134. 499-507 (2003)

Saneyoshi，T.，Kume，S.，Mikoshiba，K.：“非洲爪蟾中的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 I”Comp.Biochem.Physiol.B Biochem.Mol.Biol.. 134. 499-507 (2003)

Rajagopal, J., Anderson, W.J., Kume, S.Martinez, O.I., Melton, D.: "Insulin staining of ES cell progeny from insulin"Science. 299. 363 (2003)

Rajagopal, J.、Anderson, W.J.、Kume, S.Martinez, O.I.、Melton, D.：“来自胰岛素的 ES 细胞后代的胰岛素染色”科学。