複数のアミノ酸生合成に関与していると予想される超好熱菌遺伝子クラスターの機能解析

预测参与多种氨基酸生物合成的超嗜热基因簇的功能分析

• 批准号: 15013204
• 负责人: 星野 貴行
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013204/
• 关键词: Thermus thermophilus; Pyrococcus horikoshii; amino acid biosynthesis

Pyrococcus horikoshii OT3株のゲノム情報に基づき、リジン及びロイシン、アルギニンの生合成に関与していると予想された遺伝子クラスターについて解析を行った。このクラスターと相同性の高いクラスターを有しており、それらがリジン生合成系遺伝子群としてのみ働いているThermus thermophilus HB27株を用いて、2種類の遺伝子破壊株を創製し、それらに、それぞれ該当するP.horikoshii OT3株の遺伝子(PH1724及びPH1721)を導入して、リジン要求性が回復するか否かを検討した。その結果、いずれの遺伝子導入によっても、HB27株の遺伝子破壊株に生じたリジン要求性の回復が認められた。これらの結果から、OT3株の「遺伝子クラスター」が、少なくともリジン生合成には働いていることが明らかとなった。T.thermophilusの遺伝子組み換え系を、本研究を効率的に遂行していけるようにするために、発現ベクターの改良を試みた。プロモーターを従来型よりも強いものに置換する、コピー数が増大したタイプの変異プラスミドをレプリコンとする、などにより、HB27株での外来遺伝子の発現効率を、従来よりも大幅に増大させることに成功した。さらに、発現ベクター(変異型を含む)の全塩基配列を明らかにし、プラスミドの複製機構及び安定化機構についての知見も得た。P.horikoshii OT3株の「遺伝子クラスター」が、ロイシン及びアルギニン生合成にも関与しているか否かの検討は、枯草菌を宿主とする系で行ったが、枯草菌で作製したロイシンまたはアルギニン要求性遺伝子破壊株の変異は、これまでのところ対応すると予想されるOT3株遺伝子の導入によっては回復されていない。

Pyrococcus horikoshii OT3 strain has the following characteristics: basic information, separation information, synthesis information, and analysis information. The high identity of this species and the high identity of this species are discussed. Thermus thermophilus HB27 strain is used in the production of two species of mutant strains. The mutant strains of P. horikoshii OT3 (PH1724 and PH1721) are introduced into the plant. As a result, the gene expression of HB27 strain was detected by PCR and the gene expression was detected by PCR. The result of this is that the OT3 strains have a lot of "genetic diversity" and a lot of "genetic diversity". T.thermophilus gene sub-group change system, this study to implement the rate of development, development and improvement In addition, the number of foreign genes in HB27 strain increased significantly, and the number of foreign genes in HB27 strain increased significantly. In addition, the discovery of the complete base configuration of the system (both heterogeneous and heterogeneous) has been made clear, the replication mechanism of the system and the knowledge of the stabilization mechanism. P.horikoshii OT3 strain "genetic diversity","genetic diversity" and "genetic diversity","genetic diversity","genetic diversity",

项目成果

Takayama, Kosuge, Sunamura, Matsui, Ishikawa K, Nakamura A, Hoshino T.: "Use of Thermus thermophilus host-vector system for expression of genes from hyperthermophilic archaeon, Pyrococcus horikoshii."J.Jap.Soc.Extremophiles. (in press). (2004)

Takayama、Kosuge、Sunamura、Matsui、Ishikawa K、Nakamura A、Hoshino T.：“使用嗜热栖热菌宿主载体系统表达来自超嗜热古菌堀越火球菌的基因。”J.Jap.Soc.Extremophiles。

Takayama, G, Kosuge, T., Maseda, H., Nakamura, A., Hoshino, T.: "Nucleotide sequence of the cryptic plasmid pTT8 from Thermus thermophilus HB8 and isolation and characterization of its high-copy-number-mutant."Plasmid. (in press). (2004)

Takayama, G、Kosuge, T.、Maseda, H.、Nakamura, A.、Hoshino, T.：“来自嗜热栖热菌 HB8 的隐秘质粒 pTT8 的核苷酸序列及其高拷贝数突变体的分离和表征。

Lombo, Takaya, Miyazaki, Gotoh, Nishiyama, Kosuge, Nakamura, Hoshino: "Functional analysis of the small subunit of the putative homoaconitase from Pyrococcus horikoshii in the Thermus lysine biosynthetic pathway."FEMS Microbiol.Lett.. (in press). (2004)

Lombo、Takaya、Miyazaki、Gotoh、Nishiyama、Kosuge、Nakamura、Hoshino：“对栖热菌赖氨酸生物合成途径中来自火球菌堀越的推定高乌头酸酶小亚基的功能分析。”FEMS Microbiol.Lett..（出版中）。