複数のアミノ酸生合成に関与していると予想される超好熱菌遺伝子クラスターの機能解析

预测参与多种氨基酸生物合成的超嗜热基因簇的功能分析

• 批准号: 16013204
• 负责人: 星野 貴行
• 金额: $ 3.46万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013204/
• 关键词: Pyrococcus horikoshii; Thermus thermophilus; Lys生合成; AAA pathway

1)Pyrococcus horikoshii推定Lys生合成クラスター遺伝子のThermus thermophilusを用いた遺伝学的解析T.thermophilusのLys、Leu、Arg生合成に関与する遺伝子を、耐熱性HPH遺伝子を用いて個別に破壊した。この株に対して、該当するP.horikoshiiの推定Lys生合成クラスター遺伝子を、pTT8をベースとした発現プラスミドに組み込んで導入し、該当するアミノ酸要求性の相補が認められるかどうかを検討した。その結果、PH1726/PH1724の導入により該当するlysTU変異を相補することが明らかになった。このことは従来の結果を裏付けるものであるが、PH1726/PH1724はleuCD変異の相補はせず、P.horikoshii遺伝子がbi-functionalな活性を有しているかどうかについてまでは明らかにすることができなかった。さらに、その他の遺伝子(PH1727,PH1722,PH1720,PH1718)については、LysおよびLeu/Arg要求性のいずれも相補しなかった。相補が認められたPH1726/PH1724の場合でも、細胞抽出液中に同タンパク質はほとんど検出されないレベルであったので、T.thermophilus内でのP.horikoshiiタンパク質の発現量が充分ではない可能性も考えられる。2)P.horikoshii遺伝子の大腸菌を用いた生化学的解析P.horikoshiiの該当遺伝子(PH1727,PH1726/PH1724,PH1722)を個別に、pET systemなどを用いて大腸菌で発現・大量生産し、酵素活性レベルで解析することを試みた。ほとんどの場合、目的タンパク質は不溶性画分に局在化しており、また酵素活性も検出されなかった。今後大腸菌を宿主とした発現系についても、さらに検討を加える必要がある。

Pyrococcus horikoshii presumes that Lys biosynthesizes <s:1> ラスタ ラスタ 伝 progenitor 伝 Thermus Thermophilus を with い た heritage 伝 learn analytical T.t hermophilus の Lys, Leu, Arg biosynthesis に masato and す る heritage 伝 を, heat-resistant HPH heritage 伝 son を with い て individual に broken 壊 し た. こ の strains に し seaborne て, should す る P.h orikoshii の presumption of Lys biosynthesis ク ラ ス タ ー heritage 伝 を, pTT8 を ベ ー ス と し た 発 now プ ラ ス ミ ド に group み 込 ん で import し, should す る ア ミ ノ acid requested sexual の phase が recognize め ら れ る か ど う か を beg し 検 た. そ の results, PH1726 / PH1724 の import に よ り should す る lysTU - different fill を phase す る こ と が Ming ら か に な っ た. こ の こ と は 従 to の results in pay け を る も の で あ る が, PH1726 / PH1724 は leuCD - different fill の phase は せ ず, P.h orikoshii posthumous son 伝 が bi - functional な activity を し て い る か ど う か に つ い て ま で は Ming ら か に す る こ と が で き な か っ た. さ ら に, そ の he の heritage 伝 child (PH1727 PH1722, PH1720, PH1718) に つ い て は, Lys お よ び Leu sex/Arg の い ず れ も phase fill し な か っ た. Phase fill が recognize め ら れ た PH1726 / PH1724 の occasions で も, cells in the extract with タ に ン パ ク qualitative は ほ と ん ど 検 out さ れ な い レ ベ ル で あ っ た の で, T.t hermophilus within で の P.h orikoshii タ ン パ ク qualitative の 発 quantity が now fully で は な い possibility も exam え ら れ る. 2) P.h orikoshii posthumous son 伝 の coliform を with い た biochemical analytical P.h orikoshii の should heritage 伝 child (PH1727 PH1726 / PH1724, PH1722) を individual に, pET System な ど を with い て coliform で し 発 now, a large number of production, enzyme activity レ ベ ル で parsing す る こ と を try み た. ほ と ん ど の occasions, purpose タ ン パ ク qualitative は insoluble draw points に bureau in turn し て お り, ま た enzyme activity も 検 out さ れ な か っ た. Future coliform を host と し た 発 now is に つ い て も, さ ら に を 検 please add え る necessary が あ る.

项目成果

Isolation of a low-molecular-weight, multicopy plasmid, pNHK101 from Thermus sp. TK10 and its use as an expression vector for T.thermophilus HB27

从栖热菌属中分离出低分子量、多拷贝质粒 pNHK101。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Plasmid 54・1
• 作者: Hideo Kobayashi;Asaomi Kuwae;Hideaki Maseda;Akira Nakamura;Takayuki Hoshino
• 通讯作者: Takayuki Hoshino