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複数のアミノ酸生合成に関与していると予想される超好熱菌遺伝子クラスターの機能解析

预测参与多种氨基酸生物合成的超嗜热基因簇的功能分析

基本信息

批准号：
16013204
负责人：
星野貴行
金额：
$ 3.46万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013204/
关键词：
Pyrococcus horikoshii Thermus thermophilus Lys生合成 AAA pathway

项目摘要

1)Pyrococcus horikoshii推定Lys生合成クラスター遺伝子のThermus thermophilusを用いた遺伝学的解析T.thermophilusのLys、Leu、Arg生合成に関与する遺伝子を、耐熱性HPH遺伝子を用いて個別に破壊した。この株に対して、該当するP.horikoshiiの推定Lys生合成クラスター遺伝子を、pTT8をベースとした発現プラスミドに組み込んで導入し、該当するアミノ酸要求性の相補が認められるかどうかを検討した。その結果、PH1726/PH1724の導入により該当するlysTU変異を相補することが明らかになった。このことは従来の結果を裏付けるものであるが、PH1726/PH1724はleuCD変異の相補はせず、P.horikoshii遺伝子がbi-functionalな活性を有しているかどうかについてまでは明らかにすることができなかった。さらに、その他の遺伝子(PH1727,PH1722,PH1720,PH1718)については、LysおよびLeu/Arg要求性のいずれも相補しなかった。相補が認められたPH1726/PH1724の場合でも、細胞抽出液中に同タンパク質はほとんど検出されないレベルであったので、T.thermophilus内でのP.horikoshiiタンパク質の発現量が充分ではない可能性も考えられる。2)P.horikoshii遺伝子の大腸菌を用いた生化学的解析P.horikoshiiの該当遺伝子(PH1727,PH1726/PH1724,PH1722)を個別に、pET systemなどを用いて大腸菌で発現・大量生産し、酵素活性レベルで解析することを試みた。ほとんどの場合、目的タンパク質は不溶性画分に局在化しており、また酵素活性も検出されなかった。今後大腸菌を宿主とした発現系についても、さらに検討を加える必要がある。

1) Pyrococcus horikoshii is presumed to be the biosynthesis of Lys into the Thermus Analysis of thermophilus's Lys, Leu, and Arg biosynthesis, heat resistance HPH's individual properties.この strains に対して, should be するP.horikoshii の presumed Lys biosynthetic クラスター伝子を, pTT8 をベースとした発成プラスミドに组み込んで Import し、should be するアミノAcid requires の相 complement がcognize められるかどうかを検した. The results of その, the introduction of PH1726/PH1724 should be the same as that of PH1726/PH1724. P.horik oshii 伝子がbi-functionalなactiveを有しているかどうかについてまでは明らかにすることができなかった.さらに、そのTAの伝子(PH1727, PH1722, PH1720, PH1718) については、LysおよびLeu/ArgRequirement のいずれも合しなかった. Complementing the situation of PH1726/PH1724, the cell extract solution is the same as the one that contains the same substanceので、T.thermophilus inner でのP.horikoshii タンパクquality の発 actual amount がfull ではないpossibility えられる. 2) Biochemical analysis of P.horikoshii's remaining coliform bacteria and pET The system uses coliform bacteria and mass-produces them, and the enzyme activity is analyzed and tested. The occasion and purpose of the ほとんどのタンパクquality は insoluble drawing is divided into しており and またenzyme activity も検出されなかった. From now on, the host of coliform bacteria will be the same as the current one, and the other one will be the one that needs to be added.