脊椎動物の中枢神経系の細胞運命決定機構の解析

脊椎动物中枢神经系统细胞命运决定机制分析

• 批准号: 15016115
• 负责人: 古川 貴久
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Osaka Bioscience Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016115/
• 关键词: 中枢神経; 網膜; 細胞運命; 光受容体; 遺伝子制御

網膜視細胞はその形態的、機能的特異性から多くの研究がなされてきたが、発生・分化のメカニズムについてはまだ十分に解明されていない。視細胞の発生に特異的に関与する遺伝子としてCrxが知られているが、その一方でCrxのノックアウトマウスにおいても視細胞の初期発生がみられることから、他の遺伝子の関与が予想される。今回我々は、Crxと同じOtxファミリーの一員であるOtx2に注目し、解析した。発生期のOtx2の視細胞における発現パターンを解析したところ、Otx2の発現はCrxにやや先行し、部位的にはほぼ重複していることが示された。Otx2のホモ接合ノックアウトマウスは胎生致死のため、Crxプロモーター制御下にCreリコンビナーゼを発現させたトランスジェニックマウスと、Otx2の第1エクソンの上流および下流にloxP配列を挿入した遺伝子操作マウスをかけ合わせることにより、Otx2のコンディショナルノックアウトマウスを作成した。このコンディショナルノックアウトマウスは、生存および繁殖可能であった。網膜および松果体における表現形を解析したところ、網膜では生後9日においても視細胞の発生はみられず、アマクリン細胞の増加がみられた。一方、松果体の発生はみられなかった。続いて、レトロウイルスベクターを用いてOtx2を生後0日の網膜にトランスフェクションし、強制発現実験を行った。細胞系譜解析の結果、ウィルスベクターが感染した細胞のほとんどは視細胞に分化していることが示された。さらに、Crxの発現制御メカニズムを検討するために、Crx上流のプロモーター領域を用いてルシフェラーゼアッセイを行ったところ、Otx2がCrxの発現を制御することが示唆される結果が得られた。これらの結果から、Otx2は視細胞の初期発生において必要かつ十分であり、Crxの上流遺伝子として機能していると考えられた。

Retinal visual cells are characterized by morphological and functional specificities, and many studies have been carried out to clarify their development and differentiation. The development of visual cells is specifically related to the transmission of genes and other genes. Now I'm back to my old self, and I'm back to my old self. The development of Otx2 in the visual cells of the analysis, Otx2 in the development of Crx in the first place, the site of the repeat Otx2 's joint is made up of Crx2 's joint, Crx2 's joint. This is the first time I've ever seen a woman who's been in a relationship with someone else. 9 days after birth, the retina and pineal gland began to grow and develop. A party, pineal gland and development of the heart. When Otx2 was used in the middle of the day after birth, coercion occurred. The results of cell line profiling show that the cells infected with the virus are differentiated. The results of this study are as follows: 1. Crx generation control system; 2. Crx upstream control system; 3. Crx upstream control system; 4. Crx upstream control system; 5. Crx upstream control system; 6. Crx upstream control system; 7. Crx upstream control system; 8. Crx upstream control system; 9. Crx upstream control system. The result of this is that Otx2 is the initial development of visual cells. It is necessary to test the function of Crx.

项目成果

Nishida, A: "Otx2 homeobox gene controls retinal photoreceptor cell fate and pineal gland development"Nature Neuroscience. 6・12. 1255-1263 (2003)

Nishida, A：“Otx2 同源盒基因控制视网膜感光细胞命运和松果体发育”《自然神经科学》6·12 1255-1263（2003）。