新規に同定したCD44細胞質内ドメインに会合するタンパク質の機能解析

新鉴定的与 CD44 胞质结构域相关的蛋白质的功能分析

• 批准号: 15024210
• 负责人: 張ヶ谷 健一
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024210/
• 关键词: 遺伝子; 癌; 生体分子; 蛋白質; CD44

1.CD44細胞質内ドメインをbaitとしたYeast Two Hybrid法で最も初期に同定されたRanBPMはCb44ERM binding domainに会合し、それ自身はLisH/CTLH domainでCD44と会合することが、判明した。RanBPMはこの会合を通して、Rho A活性化を仲介することが見出され,そのsiRNA導入はHeLaS3細胞のCD44依存性運動能を完全にブロックした。したがって、RanBPMはCD44誘導性癌細胞運動能を阻止する分子ターゲットとなる可能性が示唆された(94^<th> Annual Meeting of AACR, Washington DC, manuscript in preparation)2.Yeast Two Hybrid法で得た新規分子(仮称3-19)のクローニングを行った。1289bpのヌクレオチドから成り、292アミノ酸からなる分子でEVH-1domain,LCR domainをもつ。この分子のsiRNAeをHeLaS3細胞に導入し、Boiden chamberを用いて運動能を測定するとこの分子のノックアウト細胞では優位に運動能が低下していた。Myc-Tag付き発現ベクターに組み込み、293T細胞でのタンパク質発現を確認した。現在、免疫沈降法でのCD44分子との共沈確認を行っている。3.CD44分子の炎症調節における機能を解析するため、CD44ノックアウトマウス(KOマウス)を用いて、Zymosanを用いた関節リウマチ類似関節炎モデルを作成した。KOマウスではWild typeマウスに比較し、より強い関節炎反応が生じることを見出した。この差異はCD44KO細胞を解析した結果、Toll-like receptor signalingの増強により生じていると考えられた。CD44分子が炎症反応の抑制に重要な分子である可能性を示唆しており、さらに解析を進めている(manuscript in preparation)。

1. CD44 cytoplasmic binding domain baits and Yeast Two Hybrid method identifies CD44 binding domain in the initial stage. The expression of siRNA in HeLaS3 cells mediated by Rho A activation was completely demonstrated. 2. Yeast Two Hybrid Method for Obtaining New Molecules (3-19) and the Possibility of Preventing CD44 Induced Cancer Cell Motility (94^<th>Annual Meeting of AACR, Washington DC, manuscript in preparation). 1289bp The siRNAe of the molecule was introduced into HeLaS3 cells, and the exercise energy of the molecule was measured by Boiden chamber. Myc-Tag discovery was confirmed in the group of 293T cells. Now, immunoprecipitation method is used to confirm the CD44 molecule. 3. CD44 molecule inflammation regulation function analysis, CD44 use, Zymosan use, arthritis-like function analysis KO The difference between CD44 KO cell analysis results, Toll-like receptor signaling and increased production. CD44 is an important molecule in the inhibition of inflammation.

项目成果

Takeuchi Y et al.: "Interleukin-11 as a stimulatory factor for bone formation prevents bone loss with advancing age in mice."J Biol Chem. 277. 49011-49018 (2002)

Takeuchi Y 等人：“Interleukin-11 作为骨形成的刺激因子，可以防止小鼠随着年龄的增长而发生骨质流失。”​​J Biol Chem。

Yagata H et al.: "Comedonecrosis is an unfavorable maker in node-negative invasive breast carcinoma."Pathol Int. 53. 501-506 (2003)

Yagata H 等人：“粉刺坏死是淋巴结阴性浸润性乳腺癌的不利标志。”Pathol Int。

Sasamura T.et al.: "neurotic, a novel maternal neurogenic gene, encodes an O-fucosyltransferase that is essential for Notch-Delta interactions."Development. 130. 4785-4795 (2003)

Sasamura T.等人：“neurotic，一种新型母体神经源性基因，编码对Notch-Delta相互作用至关重要的O-岩藻糖基转移酶。”开发。

Se Lin et al.: "Identification of new human mastermind proteins defines a family that consists of Positive regulators for notch signaling"J Biol Chem. 277. 50612-50620 (2002)

Se Lin 等人：“新人类主谋蛋白的鉴定定义了一个由缺口信号传导的正调节因子组成的家族”J Biol Chem。

Fujita Y et al.: "CD44 signaling through focal adhesion kinase and its anti-apoptotic effect."FEBS Lett. 528. 101-108 (2002)

Fujita Y 等人：“CD44 通过粘着斑激酶发出信号及其抗凋亡作用。”FEBS Lett。