インターロイキン11の産生とその遺伝子導入マウスの作製

IL-11的产生及其转基因小鼠的产生

• 批准号: 05670188
• 负责人: 張ヶ谷 健一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670188/
• 关键词: IL-11; 骨髄ストローマ細胞

骨髄初期培養から分離した紡錘形形態を示すヒトストローマ細胞およびヒト骨髄ストローマ細胞株におけるIL-11mRNA発現は各々の細胞から採取したtotal RNA 5μgをアガロースゲルに泳動した後Nothern blottingを行い、^<32>PラベルIL-11cDNAにてハイブリダイゼションをしても、ほとんどシグナルは検出できない。しかし、同様のRNAからcDNAを作製、IL-11 3'末端側350bpの両端にprimerを設定し、PCR増幅することにより、350bpの単一増幅産物は確認できる。これらの細胞株培養系にTPA10ng/ml,Ca ionophore A23187 10μMを加えて、16時間後に回収した細胞から抽出したRNAではIL-11メッセージは、KM-102、骨髄ストローマ細胞、ヒト二倍体胎児肺線維芽細胞株では著増、KM-101,KM-104,KM-105では軽度から中等度の発現増強を示した。KM-102細胞はTPA,A23187添加後1時間後には有為なIL-11メッセージの発現がみられ、徐々に増加して6時間後にはほぼplateuaに達する。この発現増強はいずれの細胞株でも、10^<-6>Mハイドロコーチゾン添加により、抑制される。KM-102細胞について発現増強と抑制の機構を解析する目的でtranscriptionを抑制するactinomycin Dを用いて実験を行った。予め、TPA,A23187で8時間培養した細胞に2μg/ml actinomycin Dを添加、経時的にRNAを採取、IL-11発現をみると6時間では1/2以下に減少している。この系にactinomycin Dの代わりにHDCを加えると2時間後にはIL-11発現は1/5以下に減少し、4時間後にはシグナルは認められなかった。actinomycin D,HDCを共存させると、HDCのIL-11発現減少作用は抑えられ、8時間後でも1/3程度に留まっており、減少はtranscriptionを止めた場合の自然のIL-11mRNAの代謝と考えられた。以上の結果は、HDCのIL-11mRNA減少作用はtranscriptionを介した間接的な機構が働いている可能性を示唆する。IL-11遺伝子導入マウスの作製に向けては、マウスαインターフェロンにて発現誘導可能なMxhGH in pGEM42ベクターにIL-11遺伝子を導入し、マウス受精卵に遺伝子導入をする段階に至っているが、生憎、千葉大学医学部動物舎が平成5年12月より4月末日まで改修工事の為に使用できないため、現在待期中である。

In the early culture of bone marrow, the spindle morphology of the isolated cells and the isolated cell lines was shown. IL-11mRNA expression was detected in each cell line. Total RNA 5μg was taken from the isolated cells. After the isolation, no blotting was performed. <32>IL-11cDNA was detected in the isolated cells. cDNA production of the same RNA sequence, primer setting for the 350bp end of IL-11, PCR amplification, and confirmation of the 350bp amplification product These cell lines were cultured with TPA10ng/ml, Caionophore A23187 10μM, and RNA was extracted from the cultured cells after 16 hours. IL-11, KM-102, BST cells, and diploid fetal lung cell lines increased, KM-101,KM-104, and KM-105 increased, and moderate levels of RNA were observed. KM-102 cells showed IL-11 expression 1 hour after addition of TPA and A23187, and IL-11 expression increased 6 hours after addition of TPA. The expression of this protein was enhanced by the addition and inhibition of 10^<-6>M protein in the cell lines. KM-102 cell transcription inhibition mechanism analysis, transcription inhibition, actinomycin D inhibition mechanism Cell culture with TPA,A23187 at 8 hours with 2μg/ml actinomycin D, RNA uptake at 8 hours, IL-11 production at 6 hours decreased by less than 1/2. This is actinomycin D. After 2 hours, IL-11 appears less than 1/5. After 4 hours, IL-11 appears less than 1/5. Actinomycin D,HDC co-exist in the early stage, IL-11 expression in HDC is reduced to 1/3 degree after 8 hours, and IL-11mRNA metabolism in the early stage is reduced. These results suggest the possibility that IL-11mRNA reduction in HDC is mediated by transcription and indirect mechanisms. IL-11 gene introduction process to develop induction possibility MxhGH in pGEM42 gene introduction process to develop stage.

项目成果

Watari,K.,Harigaya,K.: "Production of human granulocyte colony-stimulatin factor by various kinds of stromal cells in vitro detected by enzyme---." Stem Cells. (in press).

Watari,K.,Harigaya,K.：“通过酶检测体外各种基质细胞产生人粒细胞集落刺激因子——”。

Uemura,N.,Harigaya,K.: "Binding of membrane-anchored macrophage colony-stimulating factor(M-CSF)to its receptor mediates specific adhesion---." Blood. 82. 2634-2640 (1993)

Uemura，N.，Harigaya，K.：“膜锚定巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）与其受体的结合介导特异性粘附——”。

Kito,M.,Harigaya,K.: "Establishment of a cell line from a human giant cell tumor" Clinical Orthopedics and Related Research. 294. 353-360 (1993)

Kito,M.,Harigaya,K.：“从人类巨细胞肿瘤中建立细胞系”临床骨科及相关研究。