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自己抗体が認識する新規tRNA結合蛋白(Wa抗原/NEFA/Nucb-2)の解析

自身抗体识别的新型 tRNA 结合蛋白（Wa 抗原/NEFA/Nucb-2）的分析

基本信息

批准号：
15030221
负责人：
三森経世
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030221/
关键词：
Wa抗原 NEFA Nucleobindin-2 トランスファーRNA 自己抗体自己免疫疾患強皮症 RT-PCR

项目摘要

抗Wa抗体は強皮症に特異的に検出されるまれな自己抗体として研究者らが報告し,その対応抗原は4-5種類のtRNAと結合する48kDa蛋白であることを明らかにしていた.Wa抗原の実体は長く不明であったが,Wa抗原の遺伝子クローニングにより,NEFAまたはNucleobindin-2 (Nucb-2)として報告された分子と一致することが判明した.NEFA/Nucb-2はその構造上DNA結合蛋白と考えられるが,これまでのところDNAあるいはtRNAを結合したという報告はない.しかし,Wa抗原が一定の種類のtRNAを結合しNEFA/Nucb-2と一致することは,同分子が新たなtRNA結合蛋白であり,tRNAが関与する蛋白翻訳系あるいはtRNAの代謝などで未知の機能を持つRNPマシーンである可能性が高い.本研究では我々が見出した抗Wa抗体の対応抗原(Wa/NEFA/Nucb-2)の機能を追求することを目的とした.1.Wa抗原に結合するtRNAの同定:すべてのアミノ酸をカバーする既知の22種類のヒトtRNA塩基配列よりプライマーを合成し,RT-PCRによりtRNAの種類を同定するシステムを開発した.抗Wa抗体プロトタイプ血清が免疫沈降したtRNAを鋳型としてRT-PCRを行ったところ,His, Lys, Met, Pro, Valの5種類のアミノ酸に対応するtRNAが同定された.2.Wa抗原全長cDNAの分離:Wa抗原をコードする全長cDNAを既知のNEFA/Nucb-2の塩基配列からRT-PCR法により合成した.既知の全長cDNAとともに,Exon 11のスキップによると考えられる90bp (30アミノ酸)が欠失した短鎖cDNAが分離された.両者から大腸菌に発現させた蛋白はともに抗Wa抗体陽性血清と反応することが確認された.3.Wa抗原とtRNAの結合:大腸菌発現Wa抗原とHeLa細胞抽出tRNA同士の直接の結合は確認できなかった.そこでHis-tagを結合したWa-cDNAをHeLa細胞に導入して発現させ,in vivoでのtRNA結合能を検討している.

Anti-Wa antibodies specific to scleroderma have been identified and reported by researchers, and all antibodies target 4-5 tRNA species and bind to 48kDa proteins.Wa antigen has an unknown length. Wa antigen is a protein that binds to a 48kDa protein. NEFA/Nucb-2 is a structurally DNA binding protein that binds to DNA. A protein binding protein is a novel tRNA binding protein associated with a Wa antigen and a tRNA of a certain species. 1. Identification of tRNA binding to Wa antigen: identification of tRNA binding to Wa antigen by RT-PCR. 2. Isolation of Wa Antigen Full-length cDNA: Synthesis of Wa Antigen Full-length cDNA by RT-PCR with NEFA/Nucb-2 Gene Alignment. The full-length cDNA of Exon 11 was isolated. 3. Wa antigen and tRNA binding: E. coli Wa antigen and HeLa cell extract tRNA binding directly. His-tag binding and wa-cDNA expression in HeLa cells were detected in vivo.

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Fujii T, Mimori T, Kimura N, Satoh S, Hirakata M: "Pseudoscleroderma associated with transforming growth factor β1-producing advanced gastric carcinoma : comment on the article by Varga."Arthritis Rheum. 48(6). 1766-1768 (2003)

Fujii T、Mimori T、Kimura N、Satoh S、Hirakata M：“与产生转化生长因子 β1 的晚期胃癌相关的假硬皮病：对 Varga 文章的评论。”Arthritis Rheum 48(6)。）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Autoantibodies from PBC patients with anti-p95c antibodies bind to recombinant p97/VCP and inhibit in vitro nuclear envelope assembly.

来自具有抗 p95c 抗体的 PBC 患者的自身抗体与重组 p97/VCP 结合并抑制体外核膜组装。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Clin Exp Immunol 136(3):
影响因子：
0
作者：
Miyachi K;Mimori T;et al.
通讯作者：
et al.

膠原病と自己抗体

胶原病和自身抗体

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
日本内科学会雑誌 93(9)
影响因子：
0
作者：
Miyachi K;Mimori T;et al.;三森経世
通讯作者：
三森経世

Yoneda O, Imai T, Nishimura M, Miyaji M, Mimori T, Ozaki T, Domae N, Fujimoto H, Minami Y, Kono T, Bloom ET, Umehara H: "Membrane-bound form of fractalkine induces IFN-γ production by NK cells"Eur J Immunol. 33. 53-58 (2003)

Yoneda O、Imai T、Nishimura M、Miyaji M、Mimori T、Ozaki T、Domae N、Fujimoto H、Minami Y、Kono T、Bloom ET、Umehara H：“膜结合形式的 fractalkine 诱导 NK 产生 IFN-γ细胞”Eur J Nutrition. 33. 53-58 (2003)