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第三世代EGFRチロシンキナーゼ阻害剤耐性遺伝子変異の検出と克服

第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药基因突变的检测与克服

基本信息

批准号：
16K18441
负责人：
岩間映二
金额：
$ 2.33万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Digital PCRを用いて、①T790MとEGFR活性型遺伝子変異、②T790MとC797S、を同時に高感度かつ定量的に検出するとともに、これらの遺伝子変異が同じアレル上にあるか、違うアレル上にあるかを区別することが可能な系を確立した。従来の検査方法によってT790Mが検出された10検体に対して本検出法を用いたところ、第一世代EGFR-TKI投与前、耐性後に関わらず、ほとんど全てのT790Mが活性型遺伝子変異と同一アレルが互いに同じアレル上にあることが示された。同様の結果を細胞株においても示した。さらに次世代シークエンスを用いて本結果の確認を行い、本検出方法の精度を確認した。また、本検出系の検出限界を調べたところ0.04%以下（10,000個のアレル中に4個以上遺伝子変異を認めれば検出可能）であった。この検出限界は、血漿中の腫瘍由来の末梢循環遊離DNA(cfDNA)から変異を検出するのに十分な感度と考えられた。以上は平成28年度～平成30年度の研究内容のうち前半の内容に相当する。平成28年6月末時点で当院において、第三世代EGFR-TKI耐性となった数例のうち、同意が得られた2名の検体（1名の血液検体、1名の血液検体と腫瘍検体）に対し、我々の方法を用いてC797S、T790Mの同時検出を試みた。C797Sは検出されなかったが、C797Sの発現は第三世代EGFR-TKI耐性症例の約20%であることが報告されており、今後、症例数を増やした検討が必要である。本方法を用いることで第三世代EGFR-TKI耐性症例における耐性遺伝子変異(C797S)の同定とT790Mとのアレル上の位置関係を明らかにすることが可能となり、日常臨床への導入によって新たな治療戦略（第一世代EGFR-TKIとの併用）に繋がると考えられる。以上の結果を英文誌に投稿し、現在査読中である。

Digital PCR is used to detect, ① T790M and EGFR active-type gene diversity, ② T790M and C797S, and simultaneously detect, detect, and detect high-sensitivity quantitative gene diversity. In the past, the detection method of T790M was used to detect 10 samples, and the first generation EGFR-TKI was used before and after the treatment. The same results were obtained from cell lines. The accuracy of the detection method is confirmed by using the next generation detection method. The detection limit of this detection system is adjusted to 0.04% or less (4 or more of the 10,000 detection limits are different). The detection limit, the origin of tumors in plasma and the detection of peripheral circulating free DNA(cfDNA) The above research content is equivalent to the first half of the research content of Heisei 28 ~ Heisei 30. At the end of June 2008, we obtained two samples (one blood sample, one blood sample and one tumor sample) from the third generation EGFR-TKI tolerance test. We used C797S and T790M to test them simultaneously. C797S has been reported to be resistant to EGFR-TKI for about 20% of the third generation. In the future, the number of cases will increase. This method is used to investigate the relationship between the third generation EGFR-TKI resistance case and the resistance gene (C797S) and the T790M resistance case, and the introduction of new treatment strategies (first generation EGFR-TKI combination) into daily clinical practice. The above results were submitted to the English Journal, and now they are checked.