Functional expression and characterization of cardiac IKs channel

心脏 IK 通道的功能表达和表征

• 批准号: 17K15556
• 负责人: 木下 耕史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K15556/
• 关键词: IKsチャネル; KCNQ1; 膜移行; Yotiao; KCNE1; Rab11; 不整脈; LQT1; LQT; Yotiao/AKAP9

KCNQ1のG589D変異体はYotiaoとの相互作用が消出する報告があるが、我々の実験系（HEK293T、KCNQ1+KCNE1+Yotiao強制発現, DynabeadsによるcoIP）では再現されなかった。そこで、KCNQ1の部分的欠損変異体（ΔhelixD, ΔhelixB-D, ΔhelixA-D, ΔN末端=isoform2に相当）を作製し、YotiaoとのcoIPを試みた結果、すべての欠損変異体で相互作用は失われなかった。さらに、IKsチャネルが膜に存在する際に細胞質側に位置するS2-S3、S4-S5領域のアミノ酸を6Ｘグリシンに置換した変異体についても検証したところ、KCNQ1-Yotiao相互作用は同様に失われることがなかった。これらの結果より、KCNQ1-Yotiao相互作用には複数の領域のアミノ酸が関わり、どれか１つをつぶしても影響が小さいことが考えられる。また、KCNE1も含めたIKsチャネル複合体は細胞膜上でのみ形成されるのか、膜移行前に形成されるのかも不明であり、今後の解析が待たれる。一方、KCNQ1のC末端helixD領域のアミノ酸置換は軒並み膜移行能が失われるが、それ以外の領域のアミノ酸も膜移行に関わることが多数報告されている。代表者は、KCNQ1の膜移行に関わる因子を同定するために、KCNQ1のシャトリングに関わるRab11ファミリーのsiRNA（silencer select, validated）によるノックダウンを試みた。これらのsiRNAは強制発現させたRab11を完全にノックダウンできることを確認した。驚くべきことにRab11をノックダウンした細胞では、KCNQ1の膜移行がわずかながら増加する結果が得られた。この結果から、KCNQ1の膜移行を亢進する因子があるとすれば、それがRab11によって抑制されていることが考えられる。

The KCNQ1 G589D system Yotiao interaction eliminates the report error, and we use the HEK293T, KCNQ1+KCNE1+Yotiao force system, Dynabeads interaction coIP to show the error again. The underweight bodies (Δ helixD, Δ helixB-D, Δ helixA-D, Δ N-terminal = isoform2 equivalent) in the parts of Yotiao and coIP are used as the results of the experiments, and the interaction between the two parts of the body is missing. The location of the cell in the membrane, the location of the cell, the location, the location, location The results of the experiment, the KCNQ1-Yotiao interaction, the complexity of the field, the number of errors in the field, and the number of errors in the field of the interaction between the two groups. The clones in KCNE1 and KCNE1 contain the clones on the membrane of the cell membrane, the formation of the membrane before migration, the formation of unknown genes, and the future analysis. On the one hand, the KCNQ1 C-terminal helixD field has a significant impact on the membrane transfer capacity, and on the other hand, on the one hand, the helixD field of the C-terminal has a significant effect on the transfer of the membrane, and most of the reports. Representative, KCNQ1, membrane migration factor, KCNQ1, membrane migration, membrane The siRNA forces you to confirm that you are fully aware that the Rab11 is complete. The results showed that there was no significant difference between the two groups in the treatment of Rab11 and KCNQ1 membrane migration. The results showed that the factors of KCNQ1 membrane migration were significantly higher than those of the control group (P < 0.05). The results showed that the membrane migration activity of KCNQ1 was significantly higher than that of the control group (P < 0.05). Results: the results showed that the factors of membrane migration in KCNQ1 were significantly increased.