糖尿病網膜症の血管新生に関与する糖タンパク質の同定と作用機序解析

糖尿病视网膜病变血管生成相关糖蛋白的鉴定及机制分析

• 批准号: 26861480
• 负责人: 高倉 美智子
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Research Institute, International Medical Center of Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26861480/
• 关键词: 糖尿病網膜症; 糖転移酵素

糖尿病網膜症は、糖尿病患者に高頻度で認められる特有な合併症である細小血管症の１つであり、その失明に直結するイベントとして血管新生がある。本研究で我々は、N-アセチルガラクトサミン転移酵素（GalNAc-T）ファミリーに注目して、糖尿病網膜症における血管新生の成因・発展、または改善に関与する新規因子の同定、ならびにそれらの血管新生に対する作用機序の解明を目指している。【糖尿病モデル血管内皮細胞の構築】入手したヒト網膜毛細血管内皮細胞を、高グルコース濃度下で培養することで、糖尿病モデル血管内皮細胞の構築を試みた。糖尿病モデルの指標因子として、酸化ストレスにより生じるチオレドキシン（TXNIP）を用い、その発現量が、通常グルコース濃度条件下に比べ、高グルコース濃度条件下で有意に亢進した時点の値とした。その結果、高グルコース濃度条件下で４日間培養した細胞に、4.2倍のTXNIP発現量が示され、以後、これらの細胞を糖尿病モデル血管内皮細胞とした。【GalNAc-Tファミリーの発現変動解析】構築した糖尿病モデル血管内皮細胞を用いて、GalNAc-Tファミリーの発現変動を解析した。GalNAc-Tファミリー（GALNT1-14、GALNTL1-6）全20種類についてプライマーを設計し、Real-time PCR解析に用いた。その結果、コントロール細胞（通常グルコース濃度）と比べ、GALNATL2に有意な発現亢進が認められた。また、有意な転写レベルの亢進が認められたGALNTL2に対する抗体を用いて、ウェスタンブロッティングによるタンパク質発現量の変動を解析した。内部標準タンパク質として、β-tublineを用いた。その結果、6日間培養した高濃度グルコース細胞に、コントロール細胞と比べ、1.2倍の発現亢進が認められた。以上の結果より、糖尿病網膜症におけるGALNTL2の関与が見出された。

Diabetic retinopathy is a common and common comorbidity in diabetic patients and is unique to diabetic patients. Vascular disease, blindness, straight knot, vascular neoplasia. This study focuses on N-Analysis enzyme (GalNAc-T), Diabetic omentum, and Diabetic omentum blood vessels. The causes and development of new blood vessels, the improvement of new blood vessels, and the improvement of new blood vessels are the same as those of new factors. [Construction of Diabetic Vascular Endothelial Cells] We started with omentum capillary endothelial cells, cultured at a high concentration of capillaries, and constructed diabetic endothelial cells. Diabetes index factor として, acidified ストレスにより生じるチオレドキシン (TXNIP) を用い, そのThe current amount is higher than normal concentration, and the time is higher than normal concentration, and the time is higher than normal concentration under high concentration. As a result, the cells were cultured in 4 days under the condition of high concentration of TXNIP, and the current amount of TXNIP was 4.2 times, and the results were shown in the future, the cells were cultured in the vascular endothelial cells of diabetes mellitus. 【GalNAc-T フファミリーの発开椉 Analysis】Construction of diabetic vascular endothelial cells is used, and GalNAc-T ファミリーの発开椉动をAnalysis is used. All 20 types of GalNAc-T ファミリー (GALNT1-14, GALNTL1-6) are designed and used for Real-time PCR analysis.その results, コントロール cells (normal グルコース concentration) and とratio, GALNATL2 に な発 appear to be hyperactive and められた.また, intentional な転WRITE レベルの Hyperactivity がcognize められたGALNTL2 に対するANTIBO をいて、ウェスタンブロッティングによるタンパクqualitative present quantityの変动をanalyticsした. Internal standards are タンパクquality として and β-tubline をいた. As a result, the high-concentration グルコース cells cultured in 6 days, the コントロール cell とratio, 1.2 times the hyperactivity of the の発 められた. The above results are the same as those of diabetic retinopathy and GALNTL2.